新疆伊犁州首起牛结节性皮肤病疫情的诊断及处置（图）

摘要：2019年8月，在新疆伊犁州察布查尔县、伊宁市、霍城县的牛群中发现牛皮肤上长满大小不等的肿胀结节， 伴有体温升高等临床症状，并有1 头牛死亡。随后专家赶赴现场开展临床诊断和流行病学调查。根据病牛临床症状和剖检变化，初步判定为牛结节性皮肤病（LSD）；采集发病牛样品，包括各种皮肤结节和血清，并采集肺脏、脾脏、淋巴结等脏器，送至省级实验室开展病原学、血清学检测，同时送至国家外来动物疫病研究中心确诊。省级实验室荧光 PCR 检测显示，发病牛样品为LSD 病毒核酸阳性 ；ELISA 检测显示，有16 份牛血清LSD病毒抗体阳性。经国家外来动物疫病研究中心检测，送检的疑似病料确诊为LSD 病毒核酸阳性，这是我国首起LSD 疫情。通过做好疫源追踪、消毒灭源、疫情解封风险评估，同时在新疆伊犁州使用山羊痘疫苗紧急免疫防治LSD，后期持续临床监测显示没有新的疫情发生。

牛结节性皮肤病（lumpy skin disease，LSD）又称牛疙瘩皮肤病、牛结节疹，是由牛结节性皮肤病病毒（lumpy skin disease virus，LSDV）引起的牛的一种急性、亚急性或慢性传染病。世界动物卫生组织（OIE）将其列为须通报动物疫病，我国在《中华人民共和国进境动物检疫疫病名录》中将其列为一类传染病。患病牛是该病的主要传染源，病毒存在于病牛的皮肤结节、肌肉、血液、内脏、唾液、鼻腔分泌物及精液中。病牛恢复后常带毒 3 周以上。

LSDV 还可以通过蚊子、苍蝇等节肢动物机械性传播，也可通过饮水、饲料或直接接触而传播，在蚊虫活跃时期由其引起的发病概率会明显增高。2019 年8月，新疆伊犁州察布查尔县、霍城县、伊宁市陆续有兽医报告发现，多个场点的牛皮肤、乳头、睾丸、鼻腔、口腔等部位长有大小不等的疙瘩。临床排查发现，累计 3 个县（市）的 17个乡镇发生上述情况。初步临床诊断后，采集特征性病变的牛皮肤结节及病死牛组织脏器开展实验室检测，并将样品及时送至中国动物卫生与流行病学中心国家外来动物疫病研究中心诊断，最终确定病原为LSDV。截至8月13日，伊犁州畜牧兽医部门累计排查活牛67.14 万头。共有 504 头牛相继发病，并伴有持续高烧，其中死亡1 头，发病率为17.83%（1/2 826），病死率为0.20%（1/504）。发病牛以母牛居多，不同年龄的牛均有发病，怀孕病牛未见流产情况。这是我国首起LSD 疫情，本文介绍了该疫情的诊断及处置情况，以期为 LSD 防控提供参考。

1　材料与方法

1.1　主要仪器设备

高速八维旋转组织研磨仪，购自德国Bertin 公司；核酸提取仪NP968，购自西安天隆有限责任公司；荧光PCR 仪QuantStudio 5，购自 ABI 公司；离心机，购自Sigma 公司；生物安全柜，购自上海力申科学仪器有限公司；冰冻切片机，购自莱卡公司；超薄切片机，购自LKB 公司。

1.2　主要试剂

LSDV 特异性引物、荧光标记探针、阳性 /阴性对照，由中国动物卫生与流行病学中心提供；DNA 病毒荧光 PCR 反 应 液（ 生产批号 YDNA20190401），购自哈尔滨世纪元亨公司；羊痘 / 牛结节性皮肤病双抗原夹心ELISA 试剂盒（生产批号 E83），购自法国IDVET 公司。

1.3　样品采集

采集3头发病牛样品共58份，包括皮肤、睾丸、乳头等部位结节和病死牛肺脏、脾脏、肾脏、淋巴结等脏器的12 份病原样品以及46 份血清样品。对采集的样品开展实验室检测，同时送至国家外来动物疫病研究中心检测。此外，LSD 疫情解封时，按照 30% 的比例全覆盖抽样，采集牛全血样本 833 份及蚊虫样品5 袋。其中察布查尔县共有15 个乡镇和1 个牧业公司，阳性同群牛2 635 头，另采集其中2个乡镇的蚊虫5 袋；伊宁市3个乡镇，阳性同群牛144 头；霍城县2个乡镇，阳性同群牛47 头。3个疫区共采样743 份抗凝血；同时3个受威胁区的规模场及散养户进行同样数量的抽样监测，昭苏县采集1 个乡镇4 个村，巩留县1 个乡镇5个村，特克斯县采集2个乡镇，3 个受威胁区各采集 30 份抗凝血共 90 份。

1.4　组织病理学检查

切取一块 2.0 cm×2.0 cm×0.3 cm 大小， 并经病原学检测为阳性的样品，以10% 甲醛和95%乙醇固定，经各种浓度乙醇脱水2 h；二甲苯透明处理，将透明好的组织块放入石蜡中包埋；修整蜡块后切片，将切好的组织蜡片用眼科镊平铺在40~45 ℃的水面上；用载玻片捞取后，倾去余水，再置入60~65 ℃恒温箱内烤片，最后进行 HE 染色和封片。

1.5　血清学检测

通过检测牛血清中LSD 病毒抗体来判定是否感染。根据羊痘 / 牛结节性皮肤病双抗原夹心ELISA 试剂盒的规程进行操作，检测牛血清中LSD病毒抗体，共检测牛血清46 份。

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