非洲猪瘟疫苗生产技术或取得重大突破

日本专家建立了可用于分离非洲猪瘟病毒的永生化猪肾巨噬细胞细胞系

非洲猪瘟病毒（ASFv）是导致非洲猪瘟的病原体，可以导致一种家猪和野猪出血性的烈性致死传染病。该病毒主要感染不能在体外生长的猪巨噬细胞和猪单核细胞。尽管近年来许多科学家就建立一个可以稳定的可用于非洲猪瘟病毒分离的细胞系做出了诸多努力，但是这些细胞系仅支持有限的低病毒复制水平并且大部分是人工减毒的毒株。

近期发表在《自然》杂志上的最新研究进展为非洲猪瘟病毒分离提供了可能的新的思路。日本动物卫生研究做评估了新型永生化猪肾巨噬细胞（IPKM）支持非洲猪瘟病毒感染的能力。研究证明IPKM细胞系可促进非洲猪瘟病毒（Armenia07毒株，Kenya05/Tk-1毒株和Espana75毒株）高水平复制（＞107.0TCID50/mL）。接种猪肺泡巨噬细胞（PAM）后可观察到红细胞吸附实验和细胞病变。实验结果证明IPKM可作为非洲猪瘟病毒分离、复制、基因操作和疫苗生产等研究的备选细胞系。

研究发现：

1 IPKM对非洲猪瘟病毒易感

非洲猪瘟病毒（Armenia07毒株，Kenya05/Tk-1毒株和Espana75毒株）接种IPKM细胞系后16小时未见明显细胞病变，但在核周围检测到荧光信号证明IPKM对非洲猪瘟病毒强毒株易感。

2 非洲猪瘟接种IPKM后可被检出：

在病毒感染系数0.1的情况下接种IPKM细胞系，Armenia07毒株，Kenya05/Tk-1毒株在接种后2天出现细胞病变，Espana75毒株在接种3天后出现细胞病变。细胞病变呈现为IPKM呈圆形，3至20个细胞聚集呈葡萄状。

3 病毒生长曲线表明非洲猪瘟病毒在IPKM细胞系上的繁殖速度等于或稍优于PAM细胞系

图1：四个非洲猪瘟毒株在IPKM和PAM细胞系上的生长曲线图

4 非洲猪瘟病毒在IPKM细胞系上连续传代10次后在CP530R区域发生一个位点的突变

研究者对Armenia07毒株在IPKM细胞系连续传代0、5、10、15代后得到的毒株进行了测序，结果表明第10代和第15代的毒株在CP530R区域发生一个位点的突变。