李晓成：论影响非瘟实验室准确检测的因素和检测目的

2020年1月6日，中国动物疫病预防控制中心联合中国动物卫生与流行病学中心举办了“全国非洲猪瘟防疫和复养技术大讲堂”，中国动物卫生与流行病学首席科学家李晓成老师分享了《感染非洲猪瘟养殖场复养指南——实验室检测》的内容，以下是根据讲课视频整理出的要点，供大家学习参考。

在非洲猪瘟的整个防控工作当中，不管是早期预警，早期发现，疑似病确诊，还是环境评估都离不开实验室检测，尤其是随着非洲猪瘟在我们国家的进一步发展，在临床上，非洲猪瘟的临床症状多样性越来越明显，我们通过临床观察很难确诊疾病，所以非瘟的诊断和防控都必须依靠实验室检测技术，对此我们需要对影响实验室诊断的一些因素必须有个清醒的认识。

一、影响实验室准确检测的因素

1 样品的代表性

李晓成老师强调，如果采的唾液样本，仍用生理盐水和PBS缓冲液，会很难保证样品的可靠性，必须加一些有效的酶抑制剂，才能有效保持唾液样本的活性，建议选用特定的保存液用于唾液样品的采集及保存。

2 样品的运输条件及保存时间

有人针对样品的保存时间做过很多实验，结果发现保存7天之内进行临床检测是比较有意义的。

3 样品处理

在我们现有的已经注册和批准使用的试剂盒当中，一般情况下不包含核酸提取试剂盒，但是有人做过很多实验，不同公司提供的核酸提取试剂盒差异非常大，提取的质量差异也很大，即使是病毒含量很高的一些样品，最终结果也能出现一些差异性结果。

4 PCR试剂盒

现阶段使用最多的是荧光定量PCR试剂盒，但随着非瘟的进一步发展，防控能力不断提升，越来越多的试剂盒会出现在我们大家的手中，如胶体金试剂盒，试纸条，免提试剂盒，还有其他一些试剂盒。每一种试剂盒的使用范围，样品种类，灵敏度，最低检测限等它是不一致的。

李晓成老师提醒我们一定要注意试剂盒的最低检测限，需要清楚知道我们使用试剂盒的检测目的，有目的性的选择试剂盒。

5 实验室操作人员

实验室操作人员在整个检测过程当中是非常重要的一个环节。因为非瘟的缘故，很多企业或者猪场新建了实验室，有些实验室人员的素质非常高，但是有些实验室的人员素质还是不尽如人意，需要进行培训。

6 实验室环境

实验室环境是容易造成污染的，所以说实验室环境应该要想办法尽可能去清除污染。

7 PCR仪器

有一个大家以前没有关注到的地方-PCR仪器，原先我们认为所有的试剂盒，所有的PCR仪器都可以适应。但是经过很多精细化的检测壁垒实验以后，有很多试剂盒对有些PCR仪器是不适用的，所以说在PCR仪器的选择方面，我们需要做一定的工作。

二、实验室检测一定要明确检测目的

（一）检测目的会直接要求对样品种类和混样比例做出明确的规定

1、目的：监测预警

-口腔和鼻腔拭子是首选样品，且混样比例不能过高，一般规定不能超过10个样。

为什么？因为猪在自然感染情况下，病毒最早出现在扁桃体，大概在3-6天，口腔和鼻腔出现这个病毒，而且在早期口腔和鼻腔当中的病毒含量不会太高，所以为了提高灵敏度，提高准确性，混样比例不宜过高。

2、目的：准确诊断

-口鼻拭子和抗凝血是最合适的样本，样本的混样比例可以加大。

准确诊断主要是用于临床，当临床上出现临床症状（疑似病例）时，血液、口腔、鼻腔、组织当中病毒含量极其高，用哪一个组织哪一个样本来检测都没有任何问题了，而且有人做过实验，即使样品稀释到1:2048，仍然能够检测到病原。

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