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樊福好:非洲猪瘟窗口期检测指南

时间:2019-06-10    点击: 次    来源:阳光畜牧网    作者:樊福好 - 小 + 大

非洲猪瘟病毒进入机体到血液中产生足够量的、并能用检测方法从血液中查出非洲猪瘟毒之间的这段时期,称之为窗口期(Window Period)。在窗口期内虽然检测不到血液中的非洲猪瘟病毒,但体内已存在该病毒,主要集中在口腔等粘膜组织内,处于局部感染(local infection)阶段,属于局限性的隐性感染(silent infection)过程。窗口期的感染者同样具有传染性,但传染性不强。

非洲猪瘟的窗口期长短不一,短者1~3天,长者2个月左右,平均为28天。抓住窗口期的有利时机是净化和控制非洲猪瘟的唯一必要手段。

窗口期过后,猪只开始出现临床症状,主要表现为精神沉郁、厌食、呕吐、腹泻、皮疹、关节痛、出血等。此时,无论是大群控制,还是个体监控,都已经失去了生产上的操作意义,非洲猪瘟窗口期处于关闭状态。

窗口期的检测和监测

确定猪只是否处于窗口期的方法很多,如病毒培养法、免疫组织荧光法、抗原检测法等,但当前最成熟的方法还是定性或定量的聚合酶链式反应(PCR)法。

1.1 检测样本的选择 根据研究数据,口腔拭子、鼻腔拭子都可以作为窗口期的检测样本,但是新鲜分泌的唾液往往具有更大的检测优势,其病毒含量远远高于口腔拭子和鼻腔拭子。新鲜分泌的唾液中非洲猪瘟病毒CT值比口鼻拭子中的非洲猪瘟病毒CT值平均低5左右。

1.2 唾液样本处理 处于窗口期的猪只,尚具备较强的特异性免疫能力和非特异性免疫能力,机体对病毒的清除作用较强,两者处于激烈对抗状态,尤其是唾液中的酶(溶菌酶、核酸酶、碱性磷酸酶等)活性较高,收集到唾液中的非洲猪瘟病毒如果含量过低,病毒很快将被唾液降解。因此,采集的唾液必须立即进行核酸保护(即抑制唾液中的酶活性)。

1.3 唾液样本检测 由于处于窗口期内唾液样本中非洲猪瘟病毒含量较低,对检测条件的要求较为苛刻。建议对检测环境(温度、空气、水、操作台面)、检测试剂套装、检测仪器进行比对和考核,慎重选择。为了取得优质的唾液样本,采样之前需要对动物进行禁食处理(12小时)。

研究证实,试管唾液中的病毒在静置或离心状态下,底部的非洲猪瘟病毒含量远远高于试管上清中的病毒含量(CT值相差1~3),所以建议从试管底部取样进行检测。

实施实验室检测工作之前,建议对操作人员进行科学采样和取样培训,培训合格后才允许从事检测工作。

影响窗口期检测效果的因素

影响窗口期检测效果的因素很多,如操作人员、试剂、检测设备,等等。

2.1操作人员 不同的操作人员,核酸检测的结果差异很大。自从国家鼓励养殖主体自主检测以后,很多猪场购置了仪器和试剂盒。由于操作人员不熟练或错误操作,既浪费了资源,也贻误了控制时机。操作人员上岗之前的操作熟练程度培训显得尤为重要。

2.2 核酸纯化 目前常用的核酸提取方法是加热裂解法、膜提取法和磁珠提取法。总体来看,加热提取法(俗称的免提法)因为核酸纯度不高、核酸提取量较低,不适合做唾液学检测。国内市场上的膜提取法的效果也存在较大差异,请进行比较后谨慎选择。

磁珠法的自动提取也是相当不错的选择,磁珠法对实验室操作人员有较高的技术要求,防止交叉污染现象的出现。

2.3 核酸扩增 核酸扩增试剂需要进行试验性比对选择,争取实现单拷贝扩增。请注意:那些适合临床检测的试剂盒大部分不适合窗口期检测。

2.4荧光数据读取 核酸检测仪对荧光数据的读取和分析也是重要的考察指标,防止出现误判现象的出现。

窗口期检测结果的生产性应用

非洲猪瘟进入中国以后,国家公布的检测方法仅仅适用于临床检测,生产指导意义不大,其中规定的采样方法在实际操作中促进了病毒的扩散和疫情的传播,建议进行紧急修正。

我国养猪业中非洲猪瘟病毒的污染面较大,尤其是来自疫区的种苗应该成为窗口期监控的重点;处于疫区的种猪企业中的种公猪和母猪应该成为窗口期监控的重点,监测频率为按周随机抽样。

科学的非洲猪瘟窗口期检测对于我国非洲猪瘟的控制具有重要的科学意义和生产实践意义,建议有关部门和科研机构高度重视窗口期检测和监测政策的制定实施和方法学研究,尽快实现我国非洲猪瘟的有效控制。

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