人兽共患病简介——利什曼原虫病

病犬的脾脏大小多属正常或中度肿大，有时可呈现脾周炎；也有时在脾脏内找不到虫体或虫体很少，仅见到脾脏内的浆细胞增生。病犬骨髓内的虫体较多。在肝脏内，利什曼原虫多寄生于枯氏细胞内，但常不如脾脏严重。病犬内脏器官中的虫体数量与皮肤感染变化的程度不一定成比例，有时皮肤内的虫体很多，而内脏的感染可能很轻，一般是脾和骨髓中的虫体多。胃肠道粘膜内，除有大量淋巴细胞核浆细胞外，尚有较多含虫的网状内皮细胞。此外，在病犬的口腔、鼻、喉咙和声带的粘膜以及心、肺、肾、膀胱等器官内均可查到原虫。

我国发现的犬利什曼原虫，均系全身感染，除皮肤外，内脏亦被原虫所侵袭。病犬被毛无光泽、且很粗糙，并逐渐脱落。在脱毛的皮肤上常因皮脂外溢出现一层白色糠秕样的鳞屑，有时由于皮肤增厚而形成结节。此种皮肤损害见于头部，尤其是耳、鼻、脸面和眼睛周围最为显著，有时在背部、四肢和尾部上也可出现。此外，皮肤上还发生溃疡，由血液和渗出物结成痂盖。疾病后期，患犬食欲不振，精神萎靡，日渐消瘦、鼻孔每因粘膜肿胀而堵塞或因溃疡而引起鼻衄。眼部常发生眼睑炎，结膜炎和角膜炎，也常见睫毛脱落。病情继续发展下去，犬的吠叫声音变得嘶哑和犬叫困难，最后因营养衰竭而死亡。

八、临床诊断

在犬内脏利什曼原虫病的早期，一般均不显症状，而且外观患犬的健康状况良好。皮肤损伤和精神萎靡仅见于本病的晚期，因此，本病的确诊均以检测到利什曼原虫为准，

（一）病原学检查

1.骨髓穿刺检查。骨髓穿刺以髂骨和肋骨较为简便安全。髂骨的穿刺部位为髂骨正中线距髂骨1cm处刺入吸取骨髓。肋骨的穿刺部位为第6或第7肋骨的腹面骨和软骨联合处。犬的淋巴结穿刺部位一般都选择肩部淋巴结。阳性率都很高，对早期诊断很有价值。

2.皮肤活动检查。检查部位可选择皮肤上的结节，用注射针头刺吸皮肤，挑取少许组织，或用手术刀取一薄片皮肤，涂片用罗氏染液染色镜检，发现虫体即可确诊。本法阳性率低。

3.培养法。用此法可提高检出率，病料接种于NNN培养基上。前鞭毛体的培养温度为20~22℃，培养3天即可发现原虫，一般7~8天观察结果，3~4周后仍无虫体出现即可视为阴性。培养成功的关键是严格的消毒。实验室的结果比现场为高。浦南谷以病人的血液进行培养，阳性率为55.6%。

4.动物接种。常用的易感动物为地鼠、黄鼠、亚洲鼠等。接种部位一般在腹腔，接种后1~2个月可获得结果。

（二）免疫学检查

免疫学检查方法一般分检出抗原和抗体两类。由于抗原可因病原消失而消失，检查抗原对于那些经过治疗后的病人或病犬最为有效，故可用于考核疗效。而检查抗体对不会发生再感染的黑热病来说有与检测抗原同样的诊断效果，而且比较经济。

（三）检测循环抗体

酶联免疫吸附试验（ELISA）。Hommel等首先试用微量酶联免疫吸附试验用于人和犬的内脏利什曼原虫病的诊断，并获得成功；王捷等用完整的前鞭毛体抗原代替可溶性抗原检测特异性抗体也取得100%的阳性符合率；王秀珍等以PVC作载体，对37例骨髓穿刺的阳性病人用快速ELISA检测，阳性符合率为100%。上述作者均证明此法的特异性很高。王秀珍用此法对骨髓穿刺涂片发现原虫的24只病犬进行检测，阳性符合率为100%，而用常规ELISA的阳性符合率为95.83%。

间接免疫荧光试验。抗原可用福尔马林固定的利什曼原虫的前鞭毛体，也可用福尔马林处理后，冻干前鞭毛体，还可用不经福尔马林处理的前鞭毛体直接制成涂片，阳性率可高达100%，其敏感性与特异性高于补体结合反应。

间接血凝试验。采用冰冻溶解法制成利什曼原虫前鞭毛体的可溶性抗原，其敏感性与特异性也高于补体结合反应。

直接凝集试验。柴君杰以杜氏利什曼原虫前鞭毛体用0.4%胰酶按1:250浓度加以处理固定，尔后用1%福尔马林的PBS稀释。将待测血清用1:25000Evas蓝的PBS稀释，与抗原进行反应。黑热病患者的凝集滴度多在1:128以上，有的可达1:4096。非黑热病病人的血清均在1:128以下。

补体结合试验。抗原可用感染动物的肝、脾，可用培养的前鞭毛体，还可用培养的分枝杆菌，其阳性率可达95%以上。适于用作早期诊断。

（四）检测循环抗原

单克隆抗体—酶联免疫吸附试验斑点直接法。将单抗与酶结合后直接检测患者血清中的循环抗原。

酶联免疫吸附试验斑点间接法。先将待测血清与单抗作用后，再与稀释的酶结合物反应。

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