非洲猪瘟病毒可以通过饮水和饲料传播

2、动物饲养

本实验使用的猪只和病毒都严格按照美国农业部动福利实施和动物福利法规关于研究和教学中关爱和使用动物的动物科学社会联邦指导原则进行。研究通过肯萨斯州立大学动物关爱和使用协会和生物安全委员会批准。

使用84头猪（平均51.8 + 2.2天），来源于同一种源。猪只分别存放于3个P3实验室的房间内。室内环境可控，每个房间每小时换气14.5次，每只猪单独一栏，每栏之间相隔1.5m以上。每栏三面为坚实的墙面，第四面有门。采用预防空气传播的措施，房间内设有对照阴性组，以观察栏舍之间是否有交叉污染的现象。

二、实验设计

水和饲料实验均设有7个组，每个组分别有6只猪进行饮水实验和6只猪进行饲料实验。在每组中给5只猪一定剂量的ASFV，另外1只作为阴性对照。为了确定ID50，我们根据相关文献研究将水103 TCID50 和饲料104 TCID50 设为初始感染剂量，然后在完成一组的实验后，根据实验结果对第二组的剂量进行调整。最后实验的剂量和分组如下表。

每天对猪只进行两次临床评估，观察有无ASF临床症状，并且在接种后0天和第5天采血。在接种后5天内出现临床症状的猪将被安乐死，采集血样和组织。存活的猪只在接种后第5天全部安乐死，并且进行剖检。采用RT-PCR检测猪脾脏和血样中的ASFV，并且对脾脏进行病毒分离。做出剂量-反应曲线并且计算ID50。

三、数据分析

本实验采用3种检测方法（PCR检测脾脏，PCR检测血清，以及脾脏病毒分离），每只猪会有一个3维结果。只要任何一个检测结果为阳性，ASFV感染视为阳性。我们使用约束性样条回归分析来分析剂量和感染率的关系。约束性被限定为剂量升高时感染率也会升高，并且这样的关系是持续的。根据三种检测的结果，我们在贝叶斯分层模型内使用约束性样条回归以估算每个剂量的病毒在一次暴露下的感染概率。在单次暴露的基础上，我们也模拟了重复暴露的高结果，假设重复暴露都是独立事件。因此，我们统计多次暴露的感染率为1 – (1 – p)q，p是单次暴露后感染的概率，q是暴露的次数。

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