我国首例非洲猪瘟的确诊

1.6　PCR 产物测定

将扩增产物使用 1% 的琼脂糖凝胶电泳，然后切胶回收，对回收的 DNA 直接用于测序。序列 拼 接 采 用 Lasergene 7.1 软 件（DNASTAR Inc. Madison，WI，USA） 中 的 EditSeq 与 MegAlign模块。多序列的比对和遗传进化树的绘制，应用MEGA 5.0 软件进行。其他国家的参考毒株序列从GenBank 中获得。

1.7 　抗体检测

西班牙 INGENASA 公司生产的非洲猪瘟阻断 ELISA 抗体检测试剂盒，批号为 050218。法国ID-vet 公司生产的非洲猪瘟间接 ELISA 抗体检测试剂盒，批号为 B71。国家外来动物疫病研究中心自主研发的非洲猪瘟间接 ELISA 试剂盒，批号为 201801。INGENASA 公司生产的非洲猪瘟阻断ELISA 试剂盒包被抗原为 p72 蛋白，IDvet 公司生产的非洲猪瘟间接 ELISA 试剂盒包被抗原为 p30、p62、p72 重组蛋白，自主研发的非洲猪瘟间接ELISA 试剂盒包被抗原为 p30 蛋白。

2　结果

2.1　荧光定量 PCR

荧光定量 PCR 检测结果显示，采自 2 只病死猪的 8 份组织样品和全血中都能检测到 ASFV 特异性扩增曲线，Ct 值为 19.14~26.5（图 2）。

扩增曲线的横坐标为扩增循环数，纵坐标为荧光强度；绿色横线位置为荧光强度的阈值，对应的循环数为临界循环数（CT）；CT值低于 40 判定为阳性；图中扩增曲线从左至右依次为 P、全血 1、脾 1、全血 2、淋巴结 2、肾 2、淋巴结 1、肾 1、脾 2

图 2　实时定量 PCR 扩增结果

2.2　普通 PCR

ASFV 普通 PCR 扩增结果显示，7 个样本（分别为全血1、淋巴结1、肾1、脾1、全血2、淋巴结2、肾 2）在 257 bp 左右有特异性扩增条带，与阳性对照一致（图 3）。样本脾 2 特异性扩增条带较弱。

1~8. 全血 1、淋巴结 1、肾 1、脾 1、全血 2、淋巴结 2、肾 2、脾

2；P. 阳性对照；N. 阴性对照；M. 分子量标记（由上至下分别为2000、1000、750、500、250、100 bp

图 3　普通 PCR 检测结果

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