河北省猪繁殖与呼吸综合征病毒遗传变异分析

图3 ORF5 基因遗传进化树

ORF5 第 151 位氨基酸位于糖蛋白的疏水区。此氨基酸的变异改变了该区域的疏水性，从而可能改变病毒毒力。研究结果显示，第 13 和 151 处的氨基酸突变与毒株毒力有关。与北美型标准株 VR-2332 相比，本试验获得的 23 个毒株中，HB-HS、HB-HD、HB-CZ 的第 13 位均发生变异（突变为P 或 Q），其他未发生变化，均为 R；HB-SJZ1、HB-HD、HB-CZ、HB-HS、HB-HS1、HB-HS2 的第 151 位已突变为赖氨酸（K）。这可能导致了该毒株毒力发生改变。而 HB-HS、HB-HD、HB-CZ同时存在第 13 和 151 处的氨基酸突变。对 ORF5基因的 RT-PCR 产物，用内切酶 Mlu Ⅰ进行 RFLP分析，以区分疫苗株和其他北美毒株。这是由于疫苗株第 137 位氨基酸为 Ala，而其他野毒株的第137 位均为 Ser。本试验获得的 23 个 ORF5 氨基酸序列中的第 137 位氨基酸均为 Ser，表明所获得的 23 个毒株均可能为野毒株。目前已确定的美洲株表位有 3 个：2 个为非中和表位（27~30和180~197），1个为中和表位（37~45）。

本试验获得的 23 个 ORF5 氨基酸序列分析表明，在非中和表位 29 位点处，除 HBBD3、HB-SJZ、HB-SJZ1、HB-HD、HB-CZ、HB-HS、HB-HS1、HB-HS2、HB-XL、HB-AG 为 Val 外， 其余均为Ala（与经典株 VR-2332 和疫苗株 MLV 相同）；在 180~197 位点中，第 185 位点均为 Ala，与国内分离的 HP-PRRSV 毒 株 SY0608、JXA1、SX-1、Henan-1 相 同，VR-2332、MLV、CH-1a 株均为Val； 第 189 位点分别均为 Leu 或 Val， 而 VR-2332、MLV 株则为 Ile；HB-BD2 第 194 位点突变为 Gly；HB-SJZ1 第 191 位点突变为 Ile，HB-HS、HB-CZ、HB-HD 为 K。在中和表位（37~45）中，除 HB-HS、HB-CZ、HB-HD 为 Leu 外， 第 39 位点均为 Ile，VR-2332、MLV 株为 Leu，而 CH-1a、HB-2（sh）株则为 Phe，NADC30 株为 Leu。这说明 23 个流行毒株的氨基酸序列中抗原表位已发生变异，其中以 HB-HS、HB-CZ、HB-HD 株变异最大。

3　讨论

自 2006 年发生 HP-PRRS 以来，河北省大中型猪场不断采取以疫苗免疫为主的积极预防措施。但鉴于 PRRSV 的高变异及重组，需要不断研究病毒的遗传变异趋势，从而保证疫苗防疫的有效性。从本次调查结果看，河北省 23 个流行毒株与国内流行的高致病性毒株缺失情况相同，均在 481 位和532~560 位缺失 30 个氨基酸。它们之间的同源性为89.5%~98.8%。调查中未发现经典毒株，原因可能与本研究所选择的发病猪场有关。因此，可以认为目前在河北省主要以 NSP2 基因组氨基酸缺失且位置相同为特征的美洲型 PRRSV 毒株流行为主。

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