用猪口腔液对猪场猪繁殖与呼吸综合征抗体进行检测

猪咀嚼物品时，可通过齿龈和位于口腔黏膜和齿龈组织的毛细血管渗出猪口腔液，其成分与血清相似，可反应出血清中的激素、药物、抗体和病毒等各种组分。目前已有商品化的工具用于猪只口腔液的收集。该采样方法无创伤、应激小、非常适合用于猪群病原及抗体水平的监测。

利用猪口腔液进行病原和抗体监测，目前已经有多项报道。已报道的猪口腔液可用于监测的疫病包括猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）、圆环II型病毒病、甲型流感、非洲猪瘟和口蹄疫。口腔液检测可成功检出病原阳性，与拭子检测结果符合率较高。而且，口腔液检测还可成功检出抗体变化趋势，与血清结果具有较好的符合率。

其中，PRRS的检测技术最成熟，已经有商用PRRS抗体检测ELISA试剂盒，可得到稳定检测结果。美国爱德华州立大学的Jeffrey Zimmerman教授报道了多项关于猪唾液采样及其在病原及抗体检测中的应用。上述研究表明口腔液采样作为一种有潜力的监测方法，有希望广泛应用于猪场和养殖户。但是目前的大多数研究是基于背景清晰的SPF猪的实验型研究，对于情况更为复杂的养殖场，其应用仍需要进一步数据支持。

为了进一步评价该方法在猪场的实际使用效果，我们利用PRRS弱毒活疫苗分别免疫母猪和仔猪，然后分不同时间段进行口腔液和血清采集，然后使用商品化的试剂盒分别测定血液和口腔液中PRRS抗体的消长水平，比较血液和唾液中的抗体消长规律并分析结果，进一步完善利用猪口腔液用于PRRS抗体水平评价的方法，以便使该技术在种猪场进行技术推广和使用。

1　材料与方法

1.1　实验设计

选取3头母猪（胎次：5～6胎，大白和长白，一年免疫两次PRRS活疫苗）用于个体血液和口腔液样品的采集；同时选取母猪对应的3圈仔猪（20日龄，每圈8～10头，未免疫）用于群体血液和口腔液样品的采集。选取的PRRS活疫苗为高致病性猪繁殖与呼吸道综合征活疫苗TJMF92株（购自新疆天康畜牧生物技术股份有限公司）。

母猪和仔猪同日免疫PRRS活疫苗，免疫后7d（1周）、14d（2周）、21d（3周）、28天 (4周 )、35d（5周）、42d（6周）、49d（7周）后分别采集口腔液；并同时通过耳缘静脉采血。3头母猪分别采集血液和口腔液；3圈小猪随机取3头采血，每圈共采集1份口腔液。

1.2　口腔液采集

自制未经漂白的原色棉绳。母猪用的棉绳直径为1.5cm；仔猪用棉绳直径为0.8cm。根据实验猪舍围栏高度，将棉绳剪成约80cm 长，使用前，将棉绳在121℃下高压灭菌20min并烘干。使用前将棉绳末端打散供猪咀嚼，绳子尽量远离污物。调节高度，保证猪容易咀嚼到。吸引猪群咀嚼15～30min后，取下棉绳，将湿润的末端放入大密封袋（8号）用力挤压。可重复采集，待口腔液收集量达3～5mL，将其转入离心管中，离心吸取上清。

图1  自制口腔液采样套装

1.3　试剂盒基本信息

依据说明书，使用IDEXX PRRS口腔黏液抗体检测试剂盒和IDEXX PRRS X3抗体检测试剂盒分别检测口腔液和血清中的PRRS抗体（采购自北京协信诗华生物科技有限公司）。

结果计算公式：S/P值=（样品的OD值—阴性对照值）/（阳性对照值-阴性对照值）；S/P值＞0.40，判为阳性；S/P值≤0.40，判为阴性。

依据说明书，使用西班牙HIPRA PRRS血液、口腔液二合一抗体检测试剂盒检测口腔液和血清中的猪繁殖与呼吸综合征抗体（采购自北京天之泰生物科技有限公司）。

结果计算公式：IRPC=（样品的OD值—阴性对照值）/（阳性对照值 - 阴性对照值）×100。IRPC＞20.0，判为阳性；IRPC≤20.0，判为阴性。

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