宁夏地区奶牛副结核病的血清学调查

牛副结核病是由副结核分支杆菌引起的以牛慢性增生性、顽固性肠炎和进行性消瘦为特征的人畜共患传染病，根据菌株培养特性及致病力可将该菌分为 3个亚型，即Ⅰ型(羊型)、Ⅱ(牛型)及Ⅲ型(生物中间型)，不同亚型培养方法不尽相同，该病主要由消化道感染，处于排菌期的牛，通过粪便、乳汁排菌，其他易感牛只通过经口途径感染该菌。副结核分枝杆菌属于胞内寄生菌，对环境抵抗力强，能长时间在饲料、水源、土壤等被污染环境中存在，呈世界性分布，我国最早在内蒙古发现牛副结核病。该病可造成奶牛体重下降、生产性能下降、产乳量降低、多种疾病的产生，给畜牧养殖业带来巨大的经济损失，严重影响养殖业的健康发展，更严重的威胁着公共卫生安全，需要引起足够重视。为了更全面掌握该病在宁夏奶牛养殖中的流行和分布情况，本研究使用美国爱得士生物科技公司（IDEXX）生产的副结核分枝杆菌抗体ELISA试剂盒对宁夏回族自治区2017年5月～7月以5%比例随机采集的1796头奶牛血清进行流行病学调查。

1 材料和方法

1.1  材料

1.1.1  被检血清 遴选宁夏石嘴山市、银川市、吴忠具有代表性的9个奶牛养殖场，按照 5%的比例随机无菌采取血样 1796 份，室温下静置 2～3 h，4 ℃下 3 000 r/min 离心 5 min，析出血清，-20 ℃保存备用，检测前放置于室温条件下自然解冻。

1.1.2 检测试剂 副结核分枝杆菌抗体检测试剂盒:美国爱得士生物科技公司（IDEXX）生产。

1.1.3 主要检测仪器设备   H-1850R 台式高速冷冻离心机（长沙湘仪离心机有限公司），iMark 酶标仪（美国 BIO-RAD 公司），RT-3000 全自动洗板机（深圳雷杜生命科学股份有限公司），微量移液器（德国 Eppendorf 公司）。

1.2检测方法

1.2.1 奶牛副结核病抗体检测  在抗原包被微量反应板加入100 μL已稀释孵育的样品和对照，震荡混匀，18-26 ℃孵育45 min或者2-8 ℃过夜孵育（16-24 h），弃去液体，300 μL洗涤溶液（20倍稀释）洗涤3次后拍干，每孔加入100 μL稀释好的酶标抗体，盖板后18-26 ℃孵育30 min，300 μL洗涤溶液（20倍稀释）洗涤3次后拍干，每孔加入100 μLTMB底物，18-26 ℃遮光孵育10 min，每孔加入100 μL终止液，450nm下测量样品盒对照的光密度值。具体操作见副结核分枝杆菌抗体检测试剂盒操作说明。

1.2.2 结果判定 阳性对照平均值大于或等于0.350，阳性对照平均值与阴性对照平均值的比值大于或等于3.00的条件下检测的结果有效，否则试验不成立，应重新检测。

按照以下S/P百分值计算判定每个样品的结果：S/P（%）=100*（OD样本-OD阴性）/（OD阳性-OD阴性）；当样品的S/P%小于或等于45%，判为抗体阳性，样品的S/P%大于45%且小于55%，判为抗体可疑，样品的S/P%大于或等于55%，判为抗体阳性。

2 结果与分析

在9个奶牛场的1796份血清样品中，检出副结核病抗体阳性血样77份，平均血清阳性率为4.29%，在9个被检牛场中有7个奶牛场检出血清阳性牛，阳性率从1.78%～15.15%不等，场感染阳性率为77.78%，具体详见表1。

表1 宁夏地区奶牛副结核病血清抗体检测结果

3.1 检测方法

牛副结核病是一种高传染性和高损伤性的疫病，给我国畜牧业带来严重损失，肉牛和奶牛还需要引起兽医公共卫生重视，所以加强该病的监测和防治具有重要意义。ELISA方法具有敏感、准确、快速、经济、主观因素影响小等优点已成为国内外动物疫病常规的检疫方法，是当前牛副结核检测最常用的方法之一，是大量样本检测的优选方法，为确保ELISA实验的准确性，采样要尽量减少血清样本运输贮藏过程中出现溶血现象。

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