2015—2016年湖南省长沙市活禽批发市场禽流感流行病学调查

禽流感是由正黏病毒科流感病毒属 A 型禽流行性感冒病毒引起的一种禽类（家禽和野禽）传染病。迄今为止，共有 16 种 HA（H1~H16）亚型和 9 种 NA（N1~N9）亚型被鉴定。禽流感病毒不仅严重影响养殖业的发展，也在其长期进化变异过程中逐步获得了跨越种间障碍感染哺乳动物的能力，对公共卫生安全形成较大威胁。有报道称，H6 亚型禽流感病毒不仅可以向 H5 亚型和 H9N2 亚型禽流感病毒提供内部基因片段，而且可以感染鼠、水貂和人。近年来，我国南方地区相继出现人 H9N2 亚型禽流感感染病例。2013 年 3 月底上海市首次出现人 H7N9 亚型流感疫情。至今，我国已经发生 5 波 H7N9 亚型流感疫情，截止到 2017 年 7 月，共有 1 500 多人感染，死亡率约为38%。

有研究显示，活禽市场在禽流感病毒的存留、繁殖以及传播过程中扮演着十分重要的角色，是人感染 H7N9 流感病毒的危险因素。为全面了解和掌握湖南省长沙市活禽批发市场禽流感病毒污染状况，便于有针对性地进行禽流感防控，保障人类健康和公共卫生安全，分别于 2015 年和 2016 年的冬春季节，对长沙市两大活禽批发市场进行了禽流感流行病学调查。

1、材料与方法

1.1　样品采集

按照简单随机抽样方法，分别在冬季和春季，到长沙市两大活禽批发市场采样。每个市场每次简单随机抽取 10 个摊位，每个摊位采集 10 份家禽咽喉或泄殖腔拭子，每次采集 10~20 份环境拭子。

1.2　主要试剂

Taq DNA 聚合酶、dNTPs 和分子量 Marker：购自宝生物工程（大连）有限公司；反转录酶、LS TRIzol RNA 提取试剂：购自 Invitrogen 公司。

1.3　鸡胚

SPF 鸡胚：购自哈尔滨兽医研究所实验动物中心。

1.4　病原分离和鉴定

将拭子样品 1 000 r/min 离心 5 min，吸取上清液；以每胚 0.2 mL 的注射剂量，由尿囊腔接种9~10 日龄 SPF 鸡胚，每个样品接种 2~3 枚，37 ℃孵育，每天观察 2 次；弃去 24 h 内死亡的鸡胚，及时收集之后死亡的鸡胚，至 96 h 收集所有鸡胚，置于 4 ℃过夜；收获鸡胚尿囊液，用血凝试验（HA）测定；对阴性者再盲传 1 代。如果 HA 仍为阴性，则终定为阴性样品。对 HA 测定有滴度的样品，再采用血凝抑制试验（HI）和 RT-PCR 相结合方法鉴定病毒。

1.5　统计分析

应用 Microsoft excel 软件进行统计分析。群阳性率 =（阳性群数 / 采集的群体数）×100%；病毒分离率 =（病毒分离数 / 采集的拭子样品数）×100%；鸡拭子病毒分离率 =（鸡拭子病毒分离数/ 采集的鸡拭子样品数）×100%；鸭拭子病毒分离率 =（鸭拭子病毒分离数 / 采集的鸭拭子样品数）×100%；环境拭子病毒分离率 =（环境拭子病毒分离数 / 采集的环境拭子样品数）×100%。

2、检测结果

2.1　总体检测情况

分别在 2015 年和 2016 年的冬春季节，对长沙市活禽批发市场进行了禽流感流行病学调查，共在 78 个摊位（每个摊位作为 1 个群体）采集禽拭子样品进行禽流感病原分离，结果在 35 个摊位分离到禽流感病毒，群阳性率为 43.6%；共采集 920份禽拭子和环境拭子样品进行病原分离鉴定，发现131 份为禽流感病毒阳性，禽流感病毒总分离率为14.24%（表 1）。

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