细菌培养与药敏试验方法及其在临床的应用

表2 不同细菌所需不同培养条件

2 药敏实验

虽然人医上很早就引进了药敏试验的说法，但在兽医临床细菌药敏试验在1999年由美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）颁布。常用的药敏试验方法主要有3种：纸片扩散法，液体培养基稀释法，琼脂稀释法。在兽医临床及一些小型实验室，纸片扩散法较为常用，液体培养基稀释法可以提供最小抑菌浓度，也是较为常用的方法。下面对纸片扩散法进行概述。

2.1  原理：将含有一定浓度药物的纸片轻轻的贴到已均匀涂布一定浓度细菌的药敏培养基上，药物会随着培养基琼脂向四周均匀扩散，这样便形成了有抗生素浓度梯度的区域，对此浓度抗生素药物敏感的细菌便不会在此区域生长，这个药物浓度便是这种细菌的最小抑菌浓度（MIC），但本方法并无法准确的测量这个浓度。最终通过测量抑菌圈的大小来判读细菌对每种不同药物的敏感或者耐药程度。

2.2  具体方法与结果判读

挑取18-24h的纯培养菌落于无菌生理盐水中混匀，制备成0.5或1.0麦氏单位浓度的菌悬液，与标准比浊管对比。用无菌棉拭子蘸取菌液，在管壁上挤压几次，压去多余的菌液，涂布整个MHA平板表面，再重复两次，每次旋转平板60°，使整个平板涂布均匀，最后用棉拭子涂布平板四周边缘。涂布菌液的平板于室温中干燥3-5min后，用纸片分配器或无菌镊子取药敏纸片，贴于平板表面，并用镊子夹轻压一下纸片使其平整牢固。35℃下培养16~18个小时，读取抑菌圈直径，个别菌的孵育温度、时间及条件需按照美国临床与实验室标准化协会（CLSI）规定，根据CLSI的最新标准，将所测量的抑菌圈大小报告为敏感（susceptible S）、中介（intermediate M）或耐药（resistant R）。敏感即使用某种药物的常规剂量，治疗该种细菌引起的感染有效，即使用该药常规剂量时所达到的平均血药浓度达到MIC的4~8倍以上；中介是指当细菌引起的感染尽在应用高剂量抗菌药时有效，或细菌处于体内抗菌药浓缩的部位或体液中时才被抑制，中介时达到平均血浓度一般相当于或略高于MIC；耐药是指药物对某一菌的MIC值高于药物在血及体液内可能达到的浓度，或细菌能产生灭活抗菌药的酶或其他耐药机制。

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