家禽实验室血清学检测释义

        近年来畜牧行业快速发展，特别是家禽业发展尤为迅速，快速发展的同时疫病成为了制约发展的重要瓶颈，故实验室监测相关配套应运而生且实验室监测在畜牧行业中的作用逐步凸显，为相关疫病诊断提供了参考依据，现针对家禽实验室血清学检测中关键要点做一分析，以资参考。

      1、 HI试验：

      原则：标准化、准确性、可参考性

      1） 准确性

      待检样品所用疫苗厂家不同，所选用检测抗原应与疫苗毒株相匹配，否则结果有差异，所以不能单纯看抗体水平高低，还应该关注检测抗原毒株匹配性，如新城疫（Lasota与VII）、H9(WJ57与Y4)等。

      2）标准化

      根据国标结合本实验室条件制定检测规范，明确实验室温度、稀释手法与次数、培养时间、读数标准、红细胞采集鸡只要求、4单位抗原配制与标定，红细胞浓度配制及标定等相关规范，保证检测结果具备标准化检测要求与流程。

      3）可参考性性

      ◎抗体检测连续性结果具有分析价值，单次检测数据意义不大，故对规模化企业应建立样本留样制度，以便参照与结果分析；

      ◎临床疑似血凝性病毒感染鸡群应根据鸡群发病病程采集血清，发病初期与中后期采样间隔7-10天，根据HI抗体变化规律来判定是否有感染迹象。

      ◎实验室应根据企业免疫程序、疫苗种类等制定本场抗体基准线，作为鸡群是否强化免疫、抗体是否异常的标准。

      2、AGP/SPA

      2.1 琼脂扩散试验：

      1）正确制备琼扩板

      优先选择质量优良的琼脂糖，避免应用琼脂粉，保证琼脂糖浓度1-1.2%，8%氯化钠，不能多次煮沸（沸腾）以免影响琼扩板使用浓度，冷却后4摄氏度保存。

      2）加样  

      打孔后封底掌握火候，以免大量融化，以手背微烫为准；根据检测要求中间孔加入已知的抗原或阳性血清，外周孔加入待检血样与阴阳性血清。

      3）结果

      加样静置15分钟后琼扩板倒置，放入湿盒中培养，培养72小时在阴性与阳性结果成立的前提下判定为最终结果。

      2.2  平板凝集试验

      1）送检血样无菌离心后冷藏保存，实验前可56摄氏度水浴30分钟，以避免非特异性反应。

      2）实验前首先进行阴性与阳性对照试验，在对照成立的情况下，在适宜的实验室温度、规定时间内肉眼或灯光下观察凝集程度。

      3）疑似阳性样本，可稀释后如1:23仍为阳性可判为真阳性。

      4）注意：采集样本后避免冷冻、鸡群有细菌性感染如葡萄球菌、支原体避免采样检测，以免假阳性造成误判。

      3、 ELISA

      1）实验室硬件要求高

      ◎优质的ELISA试剂盒检测中对环境温度要求较高，保证18-25摄氏度的实验室温度；

      ◎ELISA试剂盒4摄氏度保存避免试剂冻结。

      ◎定期校正微量移液器与酶标仪

      ◎进口的微量滴头，以免微量取样的不准确性。

      2）实验操作过程严谨

      ◎试剂盒试剂充分回温，但要避免试剂板反复回温。

      ◎严格挑选待检血样，严重溶血、细菌污染、浑浊血样剔除。

      ◎实验用水严格把控应用纯净水或无离子水。

      ◎取样时要除去枪头外表面多余的样品，保证加样的准确度。

      ◎加入待检样品时滴头不要接触底壁并且要混匀。

      ◎样品稀释倍数大的，要应用2步或3步稀释法。（500倍-10X 10X 5X)

      ◎洗板过程中要垂直甩板，甩干净且在反应孔没有干情况下加入下一步试剂。

      ◎试验操作中避免手接触反应板底部，以免影响实验结果。

      ◎放置ELISA板工作台温度不能太高、不能太凉，避免阳光直射且避开风口。

      ◎不同批次的试剂盒试剂不能混用，不同疾病试剂混用（如稀释液）要咨询试剂盒厂家。

      ◎酶标仪要按照试剂盒要求的波长读数。

      3）实验结果分析

      对于常见疫病如IB、REO、IBD、APV、 CAV、MG、MS等要建立本场的一免、二免的抗体基准线，根据抗体水平是否在免疫抗体范围内判定鸡群的感染压力。

      不同品种鸡群在针对常见疫病的检测中抗体水平有差异，应做好品种、免疫程序、抗体基准线的统一性。