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不同羊传染性胸膜肺炎疫苗免疫效果评价试验

时间:2017-01-24    点击: 次    来源:阳光畜牧网    作者:佚名 - 小 + 大

        羊传染性胸膜肺炎病原体有多种,包括感染山羊的山羊肺炎支原体 (山羊支原体肺炎亚种、山羊丝状支原体亚种),感染绵羊的绵羊肺炎支原体及可同时感染绵羊山羊的肺炎支原体等。支原体是一类不同于细菌和病毒的微生物,呈革兰氏阴性,对外界环境抵抗力较差。是OIE法定报告动物传染病之一。我国于2007年分离出1株山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp. capripneumoniae, Mccp),并在同年证明上世纪50年代分离的3株“山羊传染性胸膜肺炎”病原也应归类于Mccp,证实了山羊传染性胸膜肺炎在我国存在。对于该病的控制疫苗的免疫是最好的途径,建议妊娠母羊或者出生羔羊免疫羊传染性胸膜肺炎疫苗,当前羊传胸疫苗在市场上有多种,免疫效果参差不齐,本文通过实验室抗体检测,比较各疫苗的免疫效果,为我们养殖户提供参考。
        一、试验分类与方法
        1、评价山羊传胸高效疫苗、普通疫苗及二价疫苗在山羊上的免疫效果试验
        1.1 试验材料:15日龄健康山羊35只;山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗(C87-1株 普通)1瓶;山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗(C87-1株 高端)1瓶;其它厂家疫苗二价苗 1瓶;5ml注射器35支;采血管若干。
        1.2 试验方法:选取一批15日龄健康山羊,随机分成4组,分别免疫山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗(C87-1株 普通)10只,山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗(C87-1株 高端)10只,其它厂家疫苗二价苗10只,普通组和二价组每只皮下注射3ml,高端组每只皮下注射2ml,另设对照组不免疫疫苗5只,各组分别在免疫后0天、7天、14天和30天采血,分离血清进行山羊传胸抗体检测,分析不同组抗体消长规律。
        2、评价山羊传胸高效疫苗、普通疫苗及二价疫苗在绵羊上的免疫效果试验
        2.1 试验材料:15日龄健康绵羊35只;山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗(C87-1株 普通)1瓶;山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗(C87-1株 高端)1瓶;其它厂家疫苗二价苗 1瓶;5ml注射器35支;采血管若干。 
        2.2 试验方法:选取一批15日龄健康绵羊,随机分成4组,分别免疫山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗(C87-1株 普通)10只,山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗(C87-1株 高端)10只,其它厂家疫苗二价苗10只,普通组和二价组每只皮下注射3ml,高端组每只皮下注射2ml,另设对照组不免疫疫苗5只,各组分别在免疫后0天、7天、14天和30天采血,分离血清进行山羊传胸抗体检测,分析不同组抗体消长规律。
        二、试验检测方法
        应用上海产羊传胸抗体试剂盒进行检测,具体操作步骤如下:
        1、编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同);
        2、加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀;
        3、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
        4、配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml后备用。
        5、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
        6、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
        7、温育:操作同3。
        8、洗涤:操作同5。
        9、显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。
        10、终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
        11、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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