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兽医实验室人员考试考点500(九)

时间:2016-08-14    点击: 次    来源:阳光畜牧网    作者:李同山等 - 小 + 大

        470、抽提RNA时防止降解的措施:
        (1)保持低温;
        (2)尽量减少抽提时间,减少暴露在空气中的时间;
       (3)使用DEPC水处理的耗材和试剂;
       (4)使用RNA酶抑制剂;
       (5)处理组织时,尽量灭活内源的RNA酶;
       (6)使用正确的储存条件;
       (7)操作过程中带口罩、手套、帽子。
        471、进行RT-PCR试验时,若提取的RNA需要长期保存,应在-70℃以下保存。
        472、聚合酶链反应产物电泳时,加样的位置应该在靠近(负)极的方向。
        473、PCR检测过程中,控制污染的主要措施:
        (1)对实验室进行严格的分区(包括配液区、提取区、扩增区和产物分析区的分区;也包括DNA和RNA提取的分区),以及严格控制物流的方向。例如:各个区的东西不交叉使用(包括白大褂、帽子、手套、板架、移液器、提取设备、提取试剂等);
        (2)严格控制环境:工作过程中尽量防止扩增物的扩散;垃圾等污染物要及时清理;用紫外线消除长片段污染物;实验空隙多通风,降低单位空间中的污染物;实验中严格控制层流;实验中使用帽子和口罩;
        (3)设立质控,实验过程的阴阳性对照是查找污染源的很好方法;
        (4)分装试剂,大包装的试剂应当分成小包装后使用;
        (5)UDG酶的使用,可以有效控制污染物。
        474、实时荧光PCR技术是近几年发展起来的一种新的DNA/RNA定量和定性技术。
        475、口蹄疫液相阻断ELISA抗体检测方法的用途和原理:
        用途:主要检测针对病毒衣壳蛋白的抗体,可用于不同动物免疫效果的评估工作。
        原理:先用待检血清与已知的一定量抗原结合,占据抗原位点,然后再用已知量的阳性血清与抗原结合,最后通过检测抗原结合阳性血清的多少反推出待检血清中特异性抗体的数量。由于该试验使用酶标抗体不受待检血清来源动物种类的影响,所以适应于各种动物(猪、牛、羊)血清的检测。
        476、禽流感HI抗体检测方法的用途和原理:
        用途:主要分两方面,应用标准病毒悬液测定血清中的相应抗体水平和应用特异性的抗体鉴定新分离的病毒。
        血凝原理:因病毒而有所不同。流感病毒的血凝作用是病毒囊膜上的血凝素与红细胞表面的受体糖蛋白相互吸附而发生的。当病毒的悬液中先加入特异性抗体,且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时,则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触。这时的红细胞凝集现象就被抑制,称为红细胞凝集抑制(HI)反应,也称为血凝抑制反应。
        477、口蹄疫O型正向血凝试验的试验原理:
        抗原与其相对应的抗体相遇,在一定条件下会形成抗原抗体复合物,但这种复合物的分子团很小,肉眼看不见。若将抗原吸附(致敏)在经过特殊处理的红细胞表面,只需要少量抗原就能大大提高抗原和抗体的反应灵敏性。这种经过口蹄疫纯化抗原致敏的红细胞与口蹄疫抗体相遇,红细胞便出现清晰可见的凝集现象。
        478、实验室检测禽流感病毒及抗体的方法和用途:
        检测病毒方法:
        (1)病毒(鸡胚、细胞)分离培养与鉴定,用途为直接分离病毒;
        (2)免疫荧光法,用途为检测组织、细胞培养物中病毒抗原;

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