八、采样及样品制备技术 381、实验室检测时,经常采集的样品种类: 血液样品:全血、血清;拭子样品:眼、呼吸道、咽、肛拭子;分泌物样品:子宫、阴道分泌物或外生殖器包皮内分泌物;组织样品:淋巴结、肝脏、脾脏、肺脏等脏器样品;体表样品:皮、毛;乳汁样品;胚胎样品;粪便样品;脑、脊髓样品;尿液样品。 382、进行动物的免疫效果监测时,应在动物接种疫苗后且产生的抗体达到高峰时进行采样(一般在接种后20-30天)。如接种禽流感灭活疫苗后,在家禽免疫后21天,随机采集家禽血清样品进行监测。 383、动物疫病监测应根据所要监测的动物群体的大小、监测目的的不同和监测能力情况等因素确定监测样本采样比例和数量,首先要确定监测点的数量或监测范围,再确定每个监测点或监测范围内的抽样比例和数量,抽样应按有关办法随机抽取,抽样比例还要根据动物群体的大小进行调整,群体越大抽样比例应该越低,同时每批次监测数量要符合生物统计学规定的最小样本数量。 384、样品采集原则: 一是以畜群为基本单位按样品随机采样原则,同时兼顾样品的平衡性和代表性。二是样本大小的确定,它取决于所监测疫病的流行程度及样本的可信限(在流行病学工作中,95%是标准可信限)。在大于1000的畜群中,可采用下述公式确定样本的大小:n=log(1-t)/log(1-d/N),式中N为总牲畜数,n为样本数,t为估计发病的牲畜百分比,d为可信限。 385、进行免疫抗体监测时,禽类每个监测点至少采集30份血清样本,家畜至少采集20份血清样本,动物群体较大时要按比例增加采样数量,家禽一般按0.1%-0.5%采样,家畜按0.5%-1.5%采样。 386、进行病原学监测时,要根据动物群体大小、推测的动物疫病感染率等因素确定采样数量,每个监测点至少采集20份样本。 387、在一个感染群体中检测到一个或更多的阳性有95%的可信度时的样品数量应根据疫病流行百分率(发病动物头数与全群动物数的百分比)来确定,流行率越高采样数量越少。 388、监测采样过程中,抽样方式主要有: (1)随机抽样:使研究对象的每个个体有同等机会被抽作样本的抽样方法。 (2)顺序抽样:在有限总体中,将所有个体一一编号,每隔一定数目,均匀抽取一个个体。 (3)分等按比例抽样:又叫分层按比例抽样法。就是把总体分成若干等次,了解每一等次约占总体的比例是多少,对每个等次按比例抽样。这种抽样方法能更有效降低抽样误差,而获得更有代表性的数据。 (4)群组抽样:又叫整群抽样。把总体分成若干群组,作为抽样单元,进行随机抽样,把所抽到的群组作全面调查,然后集中起来估计总体的参数。 389、猪活体采样类型: 主要有扁桃体采样和鼻腔拭子、咽拭子采样。 扁桃体采集方法:从活体采取扁桃体样品时,应使用专用扁桃体采集器,先用开口器,可以看到突起的扁桃体,把采样钩放在扁桃体上,快速扣动扳机取出扁桃体放离心管中,冷藏送检。 鼻拭子、咽拭子采集方法:用灭菌的棉拭子采集鼻腔、咽喉的分泌物,蘸取分泌物后,立即将拭子浸入保存液中,密封低温保存。 390、牛海绵状脑病病原检测时采取脑组织样品。 391、液态样品包装时,样品量不可超过容量的80%。 392、采用比较抗体效价变化方法进行血清学诊断时,通常采集双份血清检测,第一份血清采于病的初期,采集第二份血清应间隔2-3周。 393、采集死亡动物的内脏病料样品时,最迟不超过动物死后6小时。 394、采集组织病料样品供做病理切片时,应将典型病变部分及相连的健康组织一并采集。 395、用组织脏器样品材料制作抹片时,先用镊子夹持局部,然后以灭菌或洁净剪刀取一小块,夹出后将其新鲜切面在玻片上压印或涂成一薄片。
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