③ 精液:肌注的疫苗对公猪通过精液传播病毒防控效果不佳(其感染及传播途径均通过黏膜系统,疫苗产生的体液及细胞免疫对黏膜免疫系统作用极小),因此检测精液对预防蓝耳和伪狂犬在配种时感染母猪非常重要,但容易被忽视。 ④ 血液:PCR检测血液中的病原时,需注意有些病毒如伪狂犬、猪瘟等病毒血症持续期极短,因此需要适当扩大样本容量,必要时为节约人力及检测成本,可以将三份血清合成一份检测。 ⑤ 扁桃体:扁桃体是重要的免疫器官,大多数病毒首先在扁桃体中定植。通过活体采样扁桃体检测,对确定隐性感染及持续感染终止期的检出率远高于血清样品。尤其在确定蓝耳的感染持续期,种猪的猪瘟带毒方面表现显著。 ⑥ 特定病原选取合适的病料:病原在不同组织中的分布不同,如猪瘟主要检测肝、脾、肾;蓝耳主要检测肺脏;伪狂犬检测脑和肺脏;圆环检测肾和脾及淋巴结;流行性腹泻检测小肠道。 3、细胞相关试验 体外培养的细胞可以模拟动物试验体内的结果,也可用于活毒的扩繁、毒价的测定等工作,是未来发展的方向。目前在几个大集团均有此设施,但该实验室对洁净程度和操作人员素质要求特别高,需要生物安全柜和相应的细胞室,可以完成以下几方面工作。 (1)病毒分离鉴定 分离纯化病毒,便于进一步分析病毒的致病性。 (2)交叉中和试验 利用分离的毒株进行交叉中和试验,可更科学地判断疫苗免疫的中和抗体对猪场分离株的中和效果,其评估的结果优于基因测序比对。 (3)血清驯化 比在活体动物上繁殖病毒安全性更高,更稳定。 (4)毒价测定 可用于测定疫苗毒价或“返饲”材料的毒价;如流行性腹泻“返饲”成功要素有以下两要点: ① “返饲”材料纯净,无PCV2和PRV等病原。 ② 毒价确定,“返饲”的病毒量需要滴定,否则母猪返饲后有散毒风险;而这些问题可通过PCR及细胞相关试验解决。
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