猪伪狂犬病 研制成功区分强弱毒感染的鉴别诊断方法：gG-EKISA(酶联免疫吸附试验)和gE-ELISA，gG-LAT(乳胶凝集试验)和gE-LAT。拟订出了我国猪伪狂犬病的根除计划，根据不同猪场、不同情况和实验室检测情况，选择不同的方案与措施。
猪繁殖与呼吸综合症：应用原核表达系统，以融合蛋白的形式高效表达了PRRSV的核衣壳蛋白(N蛋白)，其含量达到了菌体蛋白含量的32％，该表达产物能与抗N蛋白的单克隆抗体发生特异性反应。活性检测试验表明，该蛋白不仅能与PRRSV的多克隆抗血清发生反应，而且反应敏感，非特异性背景较低，与以全病毒为包被抗原进行的ELISA检测结果相吻合。这为今后以此表达产物为抗原，建立反应敏感、特异、准确的PBRSV的检测方法，从而替代用制备过程比较复杂的全病毒为抗原进行ELISA检测奠定了基础。研究表明，PRBSVORF5编码的GP5(E)蛋白能在猪体内诱导产生中和抗体，且起主要作用的表位是构象型中和表位，与GP5蛋白的二级结构密切相关。PRRSV中国分离株B13株的ORF基因被正确插入到杆状病毒的基因组DNA中，构建出了重组病毒AcMNPV-OCC-ORF5，用该重组病毒感染Sf9细胞，获得了能够被猪抗PRRSV B13株血清特异识别的表达产物。ORF5基因表达产物与天然蛋白分子量十分接近，说明杆状病毒表达系统能较适当地进行合成蛋白的加工和修饰，为PRRS基因工程疫苗的研究奠定了基础。建立了诊断猪繁殖与呼吸综合症与日本乙型脑炎的二联PCR方法。建立了微量免疫滴定技术测定PRRSV TCID50的新方法——免疫染色法。应用蚀斑克隆技术对一株美洲株疫苗弱毒株进行了筛选，选育出高增殖力的、安全高价的弱毒株。
猪圆环病毒感染：分离鉴定了国内PCV毒株。通过DNA序列分析证实，圆环病毒(PCV)中国分离株与国外分离株同源性不是特别高，推测病毒已发生变异。建立并初步应用了检测PCV的复合PCR方法。
猪细小病毒病：国内已经开始了猪细小病毒病基因工程亚单位疫苗以及核酸疫苗的研究。试验表明，以PPV结构基因VPI和VP2分别构建的核酸疫苗，均能诱导产生较高水平的体液免疫和细胞免疫。核酸疫苗的生产简便，成本低廉，有着理想的应用前景。对PPV SY-99株非结构蛋白NS1基因进行了克隆与原核表达，其意义在于检测NSI的抗体可以用来区别灭活疫苗免疫猪和自然感染猪。
猪乙型脑炎：应用pET-30b（＋）表达载体表达的NS1蛋白具有较好的免疫学活性，可作为一种候选亚单位疫苗。
猪链球菌病：荚膜2型猪链球菌已成为一种重要的新病原菌，致病差异与各菌株的毒力因子是直接相关的。已知的毒力因子有溶菌酶释放因子(MRP)、细胞外蛋白因子（EF）、溶血素、荚膜多糖以及44K蛋白、IgG结合蛋白、纤毛、粘着素等。其中溶菌酶释放蛋白（MRP）与细胞外蛋白因子（EF）是猪链球菌2型的两种最重要的毒力因子。基因序列同源性分析结果显示：我国猪链球菌2型江苏分离株SS2-1毒力因子MRP与EF基因序列与国外分离株的两毒力因子的序列高度一致。这一结果表明猪链球菌2型菌株的毒力因子MRP与EF的基因序列极为保守，从而为2型链球菌毒力因子MRP与EF的基因检测与鉴定以及猪链球菌2型菌的免疫研究提供了依据。建立了PCB检测方法，有利于疾病发生时的快速诊断和流行病学的调查。建立了检测MRP的PCR方法，全程只需7小时左右，且最低只需100个细菌即能检出，敏感性和特异性很高。在对临床分离的致病性猪链球菌进行分群鉴定的基础上，通过随机扩增多态性DNA（PAPD）技术对其分型，确定了不同菌株间的遗传距离，挑选出有代表性的菌株制成多价灭活疫苗，用于猪链球菌病的免疫防治。建立了链球菌特异性间接血凝（I-HA）试验方法，为链球菌的分群鉴定、血清学调查、多价疫苗菌种的选择以及疫苗应用效果的监测提供了新的检测手段。链球菌病多价灭活疫苗首次在国内明确采用C、D两强毒菌株作为制苗材料，由于C、D群是国内脑炎型和败血型链球菌病的主要病原，所以这种疫苗具有广泛的适用性，克服了各地现行的弱毒或灭活的单价苗抗原的片面性和局限性。系统、全面地提出了本病诊断、致病菌的分离和分群鉴定以及疫苗的免疫程序、药物防治、消毒及管理诸方面一整套综合措施。
|
