李晓东 李建民等 （廊坊市动物疫病预防控制中心 065000） 一直以来禽呼吸道疾病就是家禽养殖业的棘手问题，我国许多地区的集约化养禽场几乎都有发生，严重影响到养禽业的经济效益。该病主要表现为呼吸道症状，发病率高，传播迅速，鸡群饲料利用率和产蛋率降低，虽用药后可以控制，但很难根治。 为了解我市蛋鸡呼吸道疾病发生和流行情况，我市动物疫病预防控制中心对该病进行了一次大规模的流行病学调查。调查主要包括禽流感、新城疫、鸡传染性喉气管炎、鸡传染性支气管炎、鸡毒支原体,调查结果如下。
1 材料与方法
1.1 材料 在我市10个县（市、区）中每个县（市、区）选择两个规模蛋鸡场和一个种鸡场，分7次进行采样，每次采集具有呼吸道症状鸡的病变组织或鼻咽喉分泌物（份数根据鸡场发病情况而定，每次采样不少于100份），血清样品每场20份（随机抽取）；采样时间为2008.7、2009.1、2009.4、200910、2010.2、2010.8、2011.3。
1.2 方法 对病料采用PCR检测技术（聚合酶链式反应技术）进行病原检测（禽流感先用禽流感胶体金快速检测试纸进行筛选，结果为阳性的再进行RT-PCR检测）。血清采用HA-HI检测技术对禽流感、新城疫进行疫苗免疫抗体水平检测。我市鸡毒支原体基本没有免疫，所以用平板凝集的方法来检测病原。
1.3 试剂 禽流感病毒抗原快速检测胶体金试剂盒，禽传染性支气管炎病毒RT-PCR（定性）检测试剂盒，鸡传染性喉气管炎病毒PCR（定性）检测试剂盒，鸡毒支原体平板凝集诊断抗原，禽流感病毒系列RT-PCR检测试剂盒，新城疫病毒RT-PCR检测试剂盒，禽流感H5N1Re-4抗体诊断抗原，新城疫抗体诊断抗原。96孔Ｖ型微量反应板，微量移液器（配有滴头），阿氏（Alsever）液、１％鸡红细胞悬液、0.01mol/LPH7.2PBS、琼脂糖、生理盐水、灭菌双蒸水。
1.4 仪器 离心机、PCR扩增仪、电泳仪、电泳槽、紫外凝胶成像仪（或紫外分析仪）、微波炉、组织研磨器、-20℃冰箱、可调移液器（2μl,20μl,200μl,1000μl）、眼科剪、眼科镊、称量纸、20ml一次性注射器、500ml量筒、500ml锥形瓶、经焦碳酸二乙酯（DEPC）水处理的1.5ml离心管和吸头（10μl,200μl,1000μl）。
1.5 判定标准
1.5.1 HA-HI：以完全抑制４个HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。只有阴性对照孔血清滴度不大于2log2，阳性对照孔血清误差不超过1个滴度,试验结果才有效。HI效价小于或等于4log2，判定HI试验为阴性；HI效价大于或等于5log2，判定HI试验为阳性。
1.5.2 禽流感胶体金快速检测试纸：检测线与对照线均出现则判断为阳性。
1.5.3 PCR(RT-PCR)检测试剂盒：H5禽流感病毒电泳时在545bp处有扩增带为禽流感病毒H5亚型阳性。H9禽流感病毒电泳时在554bp处有扩增带为禽流感病毒H9亚型阳性。新城疫病毒电泳时在460bp处有扩增带为新城疫病毒阳性。传染性支气管炎病毒电泳时在1720 bp处有扩增带的为传染性支气管炎阳性。传染性喉气管炎病毒电泳时在295bp处有扩增带的为传染性喉气管炎阳性。
2 结果
此次流行病学调查经历了两年多的时间，共采样检测血清学样品6800份，病原学样品9360份，结果如下：
2.1 确定了蛋鸡呼吸道病的发病次序
通过调查发现我市蛋鸡呼吸道病以传染性支气管炎发病率最高,为21.2%；支原体次之18.9%，以慢性呼吸道病为主，死亡率较低；传染性喉气管炎发病率第三17.8%，但死亡率较高；非典型新城疫第四12.1%，在不同的鸡场偶发，具体情况见表一。 表一：蛋鸡呼吸道病主要疫病发病情况统计表 | 病种 | 发病次数 | 存栏量（只） | 发病数（只） | 死亡数（只） | 发病率（%） | 死亡率（%） | | 传染性喉炎 | 100 | 321700 | 55520 | 13307 | 17.8 | 4.3 | | 传染性支气管炎 | 70 | 186600 | 39500 | 3456 | 21.2 | 1.9 | | 新城疫 | 23 | 100000 | 12060 | 811 | 12.1 | 0.8 | | 支原体 | 43 | 209600 | 39520 | 3281 | 18.9 | 1.6 |
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