乳及乳制品中舒巴坦敏感β-内酰胺酶类药物检验杯碟法

按照下列顺序分别将青霉素标准溶液、β-内酰胺酶标准溶液、舒巴坦标准溶液加入到样品及纯水中：

A 青霉素5 μL。

B 舒巴坦25 μL、青霉素5 μL。

C β-内酰胺酶25 μL、青霉素G5 μL。

D β-内酰胺酶25 μL、舒巴坦25 μL、青霉素5 μL。

混匀后，将上述A～D 试样各200 μL 加入放置于检验用平板上的4个无菌牛津杯中，36士1℃培养培养18～22 h ，测量抑菌圈直径。每个样品，取三次平行试验平均值。

5.5 结果报告

纯水样品结果应为：（A）、（B）、（D）均应产生抑菌圈；（A）的抑菌圈与（B）的抑菌圈相比，差异在3 mm以内(含3 mm)，且重复性良好；（C）的抑菌圈小于（D）的抑菌圈，差异在3 mm以上(含3 mm)，且重复性良好。如为此结果，则系统成立，可对样品结果进行如下判定。

7.1 如果样品结果中（B）和、（D）均产生抑菌圈，且（C）与（D）抑菌圈差异在3 mm以上（含3 mm）时，可按7.1.1、7.1.2 判定结果。

7.1.1（A）的抑菌圈小于（B）的抑菌圈差异在3 mm以上(含3 mm),且重复性良好，应判定该试样添加有β- 内酰胺酶，报告β- 内酰胺酶类药物检验结果阳性。

7.1.2（A）的抑菌圈同（B）的抑菌圈差异小于3 mm，且重复性良好，应判定该试样未添加有β- 内酰胺酶，报告β- 内酰胺酶类药物检验结果阴性。

7.2 如果（A）和（B）均不产生抑菌圈，应将样品稀释后再进行检测。

附 录 A

（规范性附录）

培 养 基

A.1 磷酸盐缓冲溶液（pH6.0）   

     无水磷酸二氢钾  8.0 g

     无水磷酸氢二钾  2.0 g

     蒸馏水          加至1000 mL

A.2 生理盐水（8.5 g/L）

     氯化钠          8.5 g

     蒸馏水          1000 mL

     121℃高压灭菌15 min。

A.3 青霉素标准溶液

    准确称取适量青霉素标准物质，用磷酸盐缓冲溶液溶解并定容为0.1  mg/mL的标准溶液。当天配制，当天使用。

A.4 β-内酰胺酶标准溶液

    准确量取或称取适量β-内酰胺酶标准物质，用磷酸盐缓冲溶液溶解并定容为16000 U/mL的标准溶液。当天配制，当天使用。

A.5 舒巴坦标准溶液

    准确称取适量舒巴坦标准物质，用磷酸盐缓冲溶液溶解并定容为1 mg/mL的标准溶液，分装后-20 ℃保存备用，不可反复冻融使用。

A.6 营养琼脂

    蛋白胨       10 g

    牛肉膏       3 g

    氯化钠       5 g

    琼脂         15-20 g

    蒸馏水       1000 mL

将上述成分加入蒸馏水中，搅混均匀，分装试管每管约5~8 mL，120℃高压灭菌15 min，灭菌后摆放斜面。

A.7 抗生素检测培养基Ⅱ

    蛋白胨      10 g

    牛肉浸膏    3 g

    氯化钠      5 g

    酵母膏      3 g

    葡萄糖      1 g

    琼脂        14 g

    蒸馏水      1000mL

将上述成分加入蒸馏水中，搅混均匀，120 ℃高压灭菌15 min，其最终pH 值约为6.6。

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