鸡病常用的实验室诊断方法

一、抹片镜捡：适用于诊断鸡曲霉菌病和球虫病等。诊断曲霉菌病时，取肺部或气囊上的结节病灶，置破片上，用另一玻片压碎、抹簿，必要时加一滴清水，在低倍显微镜下观察有无菌丝和袍子。诊断球虫病时，在病变肠段刮取粘膜少许，或取内容物少许，置琐片上，抹薄，加一二滴清水，于低倍微镜下观察有无卵囊和裂殖体。

二、染色片镜检：适用于禽霍乱等细菌性传染病的诊断，分为制片、染色、镜检三个步骤。

第一制片：以无菌操作剪下一小块肝或脾，将切面在无菌玻片上轻压一下，留下压迹，晾干。这样制作的标本称为触片。如果检验血液或其它液态病料，则用无菌玻片的一端蘸取少许病料，在另一无菌破片上均匀推出一条薄的涂面，晾干。这样制作的标本称为涂片。触片或涂片制好后，要用火焰固定，即在酒精灯火焰的上方迅速地来回通过3—4次，使片温大约达到60℃．便起到固定作用。

第二染色：方法有很多种，常用的为美蓝染色和革兰氏染色。

美蓝染色：以美蓝(亚甲蓝)的饱和酒精溶液30毫升加苛性钾水溶液(1：10000)100毫升，即配成染色液(平时配好备用)。将染色液滴于触片或涂片上，约2分钟，倾去，再用水冲洗，用吸水纸吸干，即可镜检。此法简单，但不能分辨病菌是革兰氏阳性还是阴性。

革兰氏染色：革兰氏染色分四步进行。

第一步：用0．5％结晶紫水溶液滴于触片或涂片上，1分钟，再以碘溶液(碘片1克、碘化钾2克、蒸馏水配成)冲去结晶紫，并保留碘液约1分钟。

第二步：以酒精洗去碘液并脱色。

第三步：用清水冲洗。

第四步：用中性红溶液(中性红l克、1％醋酸2毫升、蒸馏水30毫升配成)复染2—4分钟，最后用清水冲洗，用吸水纸吸干。

第三镜检：在玻片上染色和透明度都比较好的地方滴香柏油一滴，置显微镜的油镑下观察。

三、全血凝集试验：是一种免疫学检验方法，可用于鸡白痢、伤寒、慢性呼吸道病、传染性滑膜炎等疾病的诊断。方法如下：

取洁净玻片，用红色或蓝色铅笔在上面划几个3．5厘米的格子，以阻挡诊断液和血液扩散。诊断什么病，用什么诊断液。一般诊断液都加染料染成蓝紫色，略有沉淀，同时摇匀，以洁净滴管吸取一滴(约0．05毫升)，滴在玻片上一个方格的中央(须滴成圆珠，勿使扩散)。同时将被检鸡翅下静脉刺破，用烧灼过的铂金耳沾取血液(约0．03毫升)，加到诊断液上，用火柴杆无火药的一端搅拌。经2一10分钟，如发生凝集反应，即出现很多类似沉渣状小团块，余下是透明液体，可判断为阳性；如未发生凝集反应，即混合液为均匀一致的暗红色，则判断为阴性。试验时，室温及诊断的温度须在20℃以上。

四、琼脂扩散试验：可用于鸡传染件法氏囊病、马立克氏病、传染性脑脊髓炎等疾病的诊断。方法是：取精制琼脂粉1克、氯化钠8克、1％硫柳汞1毫升，加蒸馏水至100毫升，水浴融化，调整pH为7.0—7.4，用纱布夹薄层脱脂棍过滤．向直径8厘米的玻璃乎皿中注入15毫升，自然冷却凝固，即制成琼脂乎板。用时以薄壁金属管在琼脂板上打儿，每组6个儿、中央1孔，直径5毫米，周围5个，直径4毫米，中央孔与周围死距离(孔边与孔边)4毫米，孔深至底。每个平皿的琼脂板上可打孔数组。打好孔后．将破皿底部在垫有石棉网的电炉上稍加热，使琼脂平板略微融化，封住孔底，即可进行试验。

若诊断鸡传染性法氏囊病，在琼脂板中央孔注入阳性血清，周围5孔中，3个孔注人被检鸡的血清，其余2孔注入生理盐水作对照，各孔都要注满而不溢出。

若诊断鸡马立克氏病，在琼脂板中央孔注入阳性血清，周围不打孔，在距中央孔边3毫米处插被检鸡羽髓丰满的羽毛根(剪短，插到底能露出一点即可)，每只鸡拔取6根羽毛．剪好插成两组，每组3根。

若诊断鸡传染性脑脊髓炎，在琼脂板中央孔注人该病抗原，周围5孔中，3个孔注入被检鸡血清，其余2孔注人生理盐水作对照。

以上工作完成后，将玻皿置37℃温箱内，经24小时开始观察、一般观察3天，如在中央孔与周围孔之间出现沉淀线，与对照孔之间不出现，则为阳性，否则为阴性。