时间：2009-05-25 点击： 次 来源：阳光畜牧网 作者：Kannan博士 - 小 + 大
| 在死后剖检时，可采集鼻甲、气管和肺样本，如果可行的话，还可采集眶下窦和气管棉拭。如果不能进行尸检和棉拭采集，建议取鸡头和颈至胸腔人口的部分，并包裹完好，置于填充冰块的隔热容器中，送交专业实验室检验。 样品的正确运输和保存可提高病毒分离或抗体检测的几率。用于RT-PCR抗原检测时，干拭子可在室温下运输和保存，但必须避免阳光直接照射和防热。用于病毒分离时，湿拭子最好采用冷链保存和运输，可将棉拭样本放置于填充冰块的聚苯乙烯隔热容器中。试管或注射器中的全血样本在提交实验室检测之前可室温保存过夜，但最好在送检前分离血清，理想情况下是采取冷藏保存和运输。血清可在-20℃下冻结保存。用于病毒分离的组织样品应尽可能快地递送实验室，同样最好在冷藏条件下运送。如果无法及时提交。组织样品也可在-70℃或至少-20℃冷冻保存后再运送。 8.2 实验室研究分析 实验室自接收样品开始，应对送检样品的详细资料作记录，在进行病毒抗原或抗体检测之前，样品可予以暂时保存。 不管是采用分子方法还是传统方法检测aMPV抗原,拭子和组织样品均需进行处理。多数aMPV的诊断都是采用RT-PCR方法，并可在二天内完成。遗憾的是，该方法不能为以后的研究工作提供活病毒。有些实验窒尝试采用气管环培养法(tracheal organ culture, TOCs)分离aMPV病毒,该方法可支持亚型A和B的生长,结果显示病毒在TOCs中纤毛运动完全停滞。 后来利用免疫荧光法或RT-PCR方法证实aMPV的确存在。已尝试采用鸡胚成纤维细胞(CEF)或Vero细胞培养分离C亚型aMPV。除TOC方法和Vet0细胞培养法之外，对易感家禽(多数采用雏火鸡)攻毒、鸡胚卵黄囊接种和其它细胞培养物被证实可用于病毒的分离鉴定。多数实验室报道他们有能力分离鉴定到aMPV亚型(图4)，但极少能做到通过核苷酸测序来区分同一亚型的野毒株和疫苗株。 8.3 实验室结果解释 用实验室结果来解释aMPV感染是件复杂而困难的事。重要的是，在下任何结论之前，禽病调查人员应分析考虑多种因素，如发病家禽所在地区／国家／养禽场，家禽生产史、临床症状、病变、疫苗、免疫程字和免疫方法。总之，在未使用疫苗预防aMPV的禽场，如果RT-PCR检测或病毒分离呈阳性，则表明该场家禽感染了aMPV。但是，众所周知在病毒感染早期的正确采样(主要指采样的时间)对检测和鉴定aMPV是极其重要的，因此aMPV检测结果呈阴性并不能充分证明家禽未受到aMPV感染。因此，需要重复采样以确证无aMPV感染，同时缺乏aMPV抗体。在aMPV免疫鸡群，抗原/抗体检测阳性应结合过去的发病史(如养殖场或该地区的野毒和疫苗株亚型)、本次使用的疫苗和免疫程序再作分析。如检测到与本次使用的疫苗株不同的亚型，则毫无疑问表明在该禽场同时存在其它亚型。如果检测到与疫苗毒亚型相同的病毒亚型，可采取进一步分子检测法（如基因测序）以区分是疫苗毒还是野毒。必须记住的是，弱毒苗免疫后数周仍可能检测到疫苗毒。 8.4 血清学 商品化试剂盒可用于aMPV血清抗体的常规检测，然后必须对检测结果进行认真分析和解释。虽然阳性检测结果表明家禽感染了aMPV，但阴性结果并不能排除家禽未感染aMPV，这是因为aMPV感染鸡并非一定会产生体液抗体，或者抗体在采样时未达到可检测到的水平。为获得最佳的抗体检测效果，最好采用包被同源抗原的ELISA反应板。已报道同源aMPV ELISA试验要优于异源aMPV ELISA试验。事实上,要检测aMPV C亚型的抗体，必须使用ELISA试剂盒。 |
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