时间：2009-05-25 点击： 次 来源：阳光畜牧网 作者：阳光网站 - 小 + 大
3.3 CSFV在体内的复制过程 CSFV感染宿主细胞后，在宿主细胞中复制完成感染过程。CSFV吸附在细胞表面，并通过其囊膜糖蛋白Erns和E2细胞膜的融合或经受体介导的胞饮作用进入感染细胞[9] 。在体外培养CSFV感染的猪肾细胞时，在细胞上传代引起Erns蛋白C端Ser476突变为Arg残基，这一改变使得不依赖硫酸乙酰肝素(HS)的病毒变为利用HS作为Erns受体的病毒，CSFV通过其Erns和细胞表面的HS的相互作用而完成最初的结合[9]。病毒进入细胞及随后其RNA从核衣壳中释放的机制尚不清楚。由于CSFV基因组RNA只有一个开放阅读框，因此其表达产物是一个3 898氨基酸残基的多聚蛋白(polyprotein)，而后再经病毒自身的或细胞的蛋白酶作用，将其裂解成数个结构蛋白与非结构蛋白(图2)。 CSFV开放阅读框编码的第一个蛋白是分子质量为23 ku的多肽p23，以前曾认为它就是病毒核衣壳蛋白，但实际上核衣壳蛋白是一个位于p23和第一个病毒蛋白E0之间的14 ku蛋白P14。p23本身具有蛋白水解酶活性，可使P14与p23之间迅速断裂，离开多聚蛋白[9-10]。 E2下游区翻译产物的研究比较少，主要是非结构蛋白的表达。在1 030位～1 310位氨基酸残基之间有一70个氨基酸组成的疏水区域，Collett认为此疏水多肽可能与内质网膜的结合有关[11]。对瘟病毒属中牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhoea virus，BVDV)和边界病毒(Border disease virus，BDV)的研究发现，非结构蛋白p125在表达后即被加工成p54和p80。p80在瘟病毒间呈极高同源性，p80属于以Eif-4a为代表的类解螺旋酶(helicase like)超家族，并形成丝氨酸蛋白结构域的一部分，因而p80是一个双功能蛋白，但尚未发现CSFV p125被加工成p80。在ORF3′端的表达产物中存在一段Gly-Asp-Asp序列，可能代表着病毒RNA依赖的RNA聚合酶的一部分[11]。 衣壳蛋白在合成后几分钟内即与基因组RNA相结合，包装进入核衣壳。E2-E2、E2-E0及E2-E1之间由二硫键(或个别较强的非共价键)连接成同型或异型二聚物，形成病毒的囊膜抗原。因此，二聚化可能在病毒装配中非常重要[9]。E2、E1的C端有疏水性氨基酸残基组成的结构，可作为跨膜结构域，使之镶嵌于CSFV囊膜脂双层中，E0无此疏水结构，它与病毒粒子的联系尚不清楚，可能与E2形成异源二聚体，但这种联系不如E1和E2那样牢固[12]。外膜蛋白糖基化后，通过内质网和高尔基体搬运到胞浆膜，成为一种跨膜蛋白。应用电镜超薄切片技术对感染细胞中病毒的形态发生进行观察的结果显示，CSFV在胞内增殖的主要部位是有丰富膜系统的细胞核周围。成熟的病毒粒子多见于细胞质中充满无定型基质的膜囊中，有时可观察到膜囊在质膜处的开口以及周围的无定型基质和其中的成熟病毒，提示CSFV可能通过这一特殊的结构向外释放，且多数释放的病毒依然吸附在无定型基质中。Gray等(1987)研究发现，在BVDV感染的细胞表面无病毒蛋白，这一现象推测BVDV是在宿主细胞内的一种光滑小膜泡中装配后，聚集在一起，再经胞吐作用，将成熟病毒释放出来。CSFV是否也以类似方式装配和释放还不清楚，但基于瘟病毒种间的相似性，可以设想CSFV也是由细胞表面以芽生方式释放。 CSFV与宿主细胞相互作用机制的研究对该病的预防和控制具有重要的意义。随着生物技术的进一步提高，许多尚不清楚的方面如病毒致病机制、宿主抗病毒机理等都将逐步得到揭示，并在此基础上开发和研制高效、安全的新型疫苗，在该病的防控中发挥重要作用。 |
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