时间：2009-05-25 点击： 次 来源：阳光畜牧网 作者：阳光网站 - 小 + 大
2.3 遗传特性 关于CSFV遗传多样性的研究，英国学者Lowing等通过分析CSFV E2糖蛋白基因的部分序列，NS5B基因和5′末端非编码区的序列，根据病毒株之间的基因序列的同源性，把猪瘟病毒分为2个群5个亚群 ，这些分型结果与单克隆抗体法和限制性内切酶图谱分析的结果一致[3]。而日本学者清水悠纪臣对分离的47株病毒的5′末端非编码区的序列进行测定，根据其同源性可把CSFV分为A，B，C 3个群，A群主要发生在日本的北部地区，包括北海道和本州的北部，B群主要发生在日本中部，而C群主要发生在南部，与中国台湾省分离的毒株同属一群[1]，说明CSFV在流行病学上的分布，既有多样性，又呈现一定的分布规律。这些规律在遗传学特性、抗原性和致病性等方面表现出密切的相关性。 3 CSFV的致病机制 3.1 CSFV的免疫病理学 猪一旦感染CSFV，就可引起持续高热、白细胞减少、皮肤变色、运动失调、扁桃体溃烂及黏膜损伤等。急性CSF病死率几乎为100%[3]。在猪感染CSFV的早期，CSFV抗原在基质单个或成团细胞中出现；随着被感染细胞的增多，全部基质细胞内均可检测到CSFV抗原的存在。随后，CSFV侵入皮肤的生发层(stratum germinativum)，舌的中间层(stratum intermedium)、舌涎腺、扁桃体中的类RE细胞(RE-like cells)、脑中的神经元及胶质细胞、外周单核白细胞、枯否氏细胞及血管窦状隙等处[3]。晚期病猪皮肤内出血变色，粒细胞增多，神经系统症状出现，体温降至正常体温以下，最后导致死亡[4]。 因此，人们不禁要问，为什么CSFV在短时间内侵入猪的全身脏器并导致其死亡？动物抵御外来致病因子的免疫系统为什没有能够有效地抵御CSFV的入侵？许多专家都致力于此研究，力求攻克这一世界难题。国外的Susa等指出，CSFV对猪的淋巴组织有嗜性，并可导致猪免疫系统的损伤[4]。在感染初期，CSFV就侵入猪的扁桃体及其外周淋巴结的B滤泡和上皮细胞中，并在其内复制。随后CSFV就扩展到淋巴结的其他部分、内皮及上皮细胞。原位杂交显示，作为病毒复制及侵入淋巴结位点的滤泡在晚期结构已遭到严重破坏[4]。另外，CSFV还感染并损伤淋巴组织的生发中心，阻碍B淋巴细胞的成熟，从而使在循环系统及淋巴组织中的B淋巴细胞缺失，病猪胸腺萎缩，白细胞减少，病猪的骨髓也遭到破坏[5]。因此，CSFV对免疫系统的损伤是导致急性死亡的一个重要原因。 3.2 CSFV对体外培养细胞的影响 CSFV在猪体内感染并破坏多种细胞，使猪迅速发病、死亡[3-4]；而在体外培养细胞中，CSFV一般不使培养细胞产生病理变化(Cytopathic effect，CPE)。但细胞可带毒传代，并在细胞分裂时将病毒传至子代细胞中。CSFV在体外培养细胞中滴度低，是目前疫苗生产中一个比较难以解决的问题。 CSFV在猪的不同组织的细胞中增殖力不同，对淋巴系统细胞有嗜性。用猪淋巴细胞38A1D培养CSFV比用PK-15细胞系培养滴度高[6]。根据是否使培养细胞产生CPE，可将BVDV分为使培养细胞产生CPE的CP型BVDV和不使细胞产生CPE的nCP型BVDV。Hewicher-Trautwein等用BVDV感染绵羊胎脑细胞培养物，发现CP型BVDV与nCP型BVDV的细胞嗜性相同，主要在脑培养物中的神经元、星形细胞及含纤黏连蛋白的细胞中增殖。CP型BVDV还可使部分细胞死亡，造成培养物中细胞类型减少。感染CSFV的猪后期表现出神经系统症状，推测CSFV与BVDV一样具有嗜神经性[7]。CSFV在神经细胞中增殖，损伤了神经细胞，从而影响了神经系统的功能，使瘟猪表现出运动失调等症状。尸体剖检证实了CSFV在猪脑神经元及胶质细胞中存在[8]。 瘟病毒属病毒对不同宿主的神经系统及免疫系统的细胞有嗜性，这种细胞嗜性有可能是导致宿主迅速发病、死亡的重要原因之一。研究CSFV等瘟病毒属病毒对体外培养的不同种类细胞的嗜性及对宿主细胞的影响，对了解CSFV致病机制及其防控至关重要。 值得一提的是，为了研究CSFV的分子生物学和免疫学特征，提高其病毒滴度是非常关键的。用Roux培养瓶或转瓶在猪肾细胞PK-15上培养CSFV是应用最为广泛的方法，其滴度一般在106～107TCID50/mL。而应用微载体细胞培养技术，至少可将CSFV的滴度提高10倍。这种微载体(Cytodex3R，Pharmacia)是一种多孔微珠，将其加于悬浮细胞培养物中，在37 ℃、体积分数为5% CO2培养箱中摇动培养时，细胞即可贴附在微载体上生长。由于减少了培养基用量，同时扩大了细胞的培养量，从而使CSFV的滴度比一般贴壁培养的毒价提高了1.5个滴度，且这种微载体经处理后仍可继续使用，因此，微载体细胞培养也是提高CSFV滴度的一个比较好的方法[8] |
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