奶牛新孢子虫病血清流行病学调查

犬新孢子虫(Neospora caninum)的终末宿主是犬，牛、绵羊、山羊、犬、马、鹿、小鼠等均可作为中间宿主。奶牛新孢子虫病对牛危害很大，主要造成孕畜流产、死胎以及新生儿的运动神经系统疾病。在新生儿的肌肉、脑组织、呼吸道分泌物、皮肤脓包等活组织中均可检查到新孢子虫。

奶牛新孢子虫病的血清学检测最常用的方法是酶联免疫吸附试验（ELISA）和间接荧光抗体试验（IFAT），其中ELISA方法是检测奶牛N.caninum抗体有效的方法。本试验分别应用IDEXX公司生产的N.caninum Antiboby Test Kit对北京地区某奶牛场随机采集的94份血清和瑞典Svanova公司生产的N.caninum Antiboby Iscom ELISA Test Kit对采自河北地区的具有流产史奶牛的55份血清进行N.caninum抗体检测，以了解上述地区奶牛新孢子虫的感染情况。同时采用牛奶记录体系（DHI）进行北京地区N.caninum抗体阳性牛与阴性牛的生产性状比较对N.caninum抗体阳性牛与N.caninum抗体阴性牛在主要生产性状方面（包括日产奶量、乳脂率和乳蛋白率）进行了比较分析，旨在了解新孢子虫感染对奶牛产奶量和奶品质量的影响。

1 材料与方法

1.1 被检血清2003年7～11月随机采集北京地区某奶牛场奶牛血清94份；2003年12月至2004年4月采自河北地区某奶牛场具有流产史的奶牛血清55份，由河北农业大学秦建华教授提供；所有血清分离后-20℃保存备用。

1.2 主要试剂 N.caninum Antiboby Test Kit，IDEXX公司产品；N.caninum Antiboby Iscom ELISA Test Kit，瑞典Svanova公司产品。奶牛生产性能分析（DHI）检测试剂：（１）溶液A（1% Triton X100）2 ml Triton X100加入到200 ml去离子水中（60℃）密封阴凉可保存30天。(2)Zero（Series 300 Milkscan调零工作液）（0.01% Triton X100） 10 ml溶液A稀释至1 000 ml。(3)Rinsing（Series 300 Milkscan清洗液） 5 g Nonfoaming Stella加入1 000 ml去离子水中。

1.3 ELISA检测奶牛血清中N.caninum抗体 分别按IDEXX公司和Svanova公司的试盒剂操作说明进行。

1.4 DHI试验方法 (1)对测试的每头奶牛在产后第2个月收集乳汁。每天3次进行挤奶，早、中、晚采样比例为4∶3∶3。每次采样量为40 ml，加入0.4 ml防腐剂。取样后放在阴凉干燥处，标明场名、牛只号、采样时间等。(2)采用MILKOSCAN 300红外线牛奶分析仪对奶样进行乳脂率和乳蛋白率成分分析。样本分析标准采用加拿大样本质量管理标准进行（每个月对仪器进行校准，使乳成分误差不大于0.03%。如果测试奶样的乳脂率不在2%~7%，乳蛋白率不在2%~5%范围之内的需重检）。(3)奶成分测定仪测定的结果进入计算机经过牛群管理软件和SAS统计软件进行数据整理，形成DHI报告。进行DHI数据分析。

2 结果

2.1 北京地区某牛场ELISA检测结果 94份血清样本中17份血清N.caninum抗体呈阳性，被检奶牛的血清阳性率为18.1%。

2．2 河北地区某牛场ELISA检测结果 55份血清样本中13份血清N.caninum抗体呈阳性，被检奶牛的血清阳性率为23.6%。

2．3 北京地区阳性奶牛乳成分分析 我们对北京地区奶牛新孢子虫病流行病学调查的奶牛场进行DHI分析，N.caninum抗体阳性奶牛与抗体阴性奶牛在日产奶量、乳蛋白率、乳脂率均有较大差别。N.caninum抗体阳性奶牛泌乳第二个月日产奶量、乳蛋白率、乳脂率测定结果见表1（血清抗体阴性奶牛的生产性能只列出平均值）。

2．4 阳性牛与阴性牛泌乳期主要生产性能比较 结果见表2。

统计显示，N.caninum血清阳性牛与血清阴性牛泌乳期的产奶量差异不显著，而二者之间的乳脂率和乳蛋白率的差异显著。

2．5 不同抗体浓度阳性牛泌乳期主要生产性能差异分析 用SAS分析软件对不同抗体浓度的N.caninum血清阳性牛泌乳期主要生产性能作新复极差多重比较，结果见表3。

表2 血清N.caninum抗体阳性牛与阴性牛日产奶量及乳成分比较

日产奶量(kg) 乳脂率(%) 乳蛋白率(%)

N.caninum抗体阳性奶牛 25.1 3.3 2.8

N.caninum抗体阴性奶牛（平均值） 27.8 3.9 3.5

阳性比阴性牛减少值的百分比（%） 9.7 15.4 20.0

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