动物结核病诊断技术标准

3.1.5粪便

有肠结核可疑时，可采集粪便进行细菌学检查，患肺结核的牛只，有时在粪便中亦可检出结核分枝杆菌。因牛常将痰液吞咽至消化道内，随粪便排出。尽量采集混有粘液或脓血的粪便。

取粪便30g，加15％～20％安替福民溶液15mL和蒸馏水55mL，混合，经2h～3h后，3000r/min～4000r/min离心30min，倾去上清液，加10mL蒸馏水于沉淀物中，将此液用纱布过滤后接种于豚鼠皮下，经1.5～2个月后剖检。

或将粪便加2倍量灭菌蒸馏水磨碎，然后加氯化钠至饱和。当液体中残渣沉淀后(液体完全澄清)，浮起的薄膜含有大量的结核分枝杆菌。取出薄膜，用等量的4％氢氧化钠(见附录A中A2)充分混合，置37℃中3h，然后离心，取沉淀物用8％盐酸中和后，即可作染色镜检、培养和动物试验。

粪便中如有粘液或脓血，可挑取粘液脓血选用任何一种消化液处理后检验。

如系纯粪便，取5g～l0g，加生理盐水约3～4倍混合后，用细铜纱网过滤，取滤液置室温中自然沉淀，然后取上层悬液置于另一大离心管或烧杯内，加消化液约3～4倍量，置37℃温箱lh～2h，同上法处理后检验。

3.1.6组织器官

尽量采集有结节病灶的部位。猪易患颈部淋巴结结核，亦易患肠系膜淋巴结核，且常呈钙化或干酪样病变。家禽常在肠、脾、肝发生结核病灶，有时亦可见于肺或卵巢。

病变组织需先研磨，制成乳剂，通常取组织乳剂或其他液状病料2mL～4mL，加入等量的5％氢氧化钠溶液，充分振摇5min～10min，或摇至发生液化为止，液化后经3000r/min～4000r/min离心15min～30min，沉淀物加1滴酚红作指示剂，以2mol/L盐酸中和至淡红色后，作染色镜检、培养和动物试验。

如病料为脓状或干酪状或钙化的结节病灶组织，可直接作染色镜检，往往可以检出众多的结核分枝杆菌。但得到阴性结果时，应浓缩处理后检验。

3.2 检验方法

3.2.1 染色镜检

3.2.1.1 涂片

先在玻片上涂布一层薄甘油蛋白(鸡蛋白20mL，甘油20mL，水杨酸钠0.4g，混匀)然后吸取标本滴加其上，涂布均匀。

如检验标本为乳汁等含脂肪较多的材料，在涂片制成后，可先用二甲苯或乙醚滴加覆盖于涂片之上，经摇动lmin～2min脱脂后倾去，再滴加95％酒精以除去二甲苯，待酒精挥发后即可染色。

3.2.1.2 染色

染色液配制方法见附录B(标准的附录)。

萎—尼氏抗酸染色：处理过的被检材料涂片后，经火焰固定，加苯酚复红染色液(见附录B中B1)覆盖，将玻片在火焰上加热至出现蒸汽(不能产生气泡)，如此热染5min(如染色液干涸，须加适量补充)。水洗后滴加3％盐酸酒精(见附录B中B2)脱色30s～60s(至无色素脱下为止)。水洗后，以骆氏美蓝染色液(见附录B中B3)复染lmin。水洗，吸干，镜检。抗酸菌应不被盐酸酒精脱色而染成红色，其他细菌与动物细胞可被盐酸酒精脱色而均被染成蓝色。

3.2.1.3 镜检

结核分枝杆菌在显微镜下呈细长平直或微弯曲的杆菌，长1.5um～5um，宽0.2um～0.5um，在陈旧培养基上或干酪性淋巴结内的菌体，偶尔可见长达l0um或更长。

3.2.2 培养

3.2.2.1 培养基配制方法见附录C(标准的附录)。

3.2.2.2 被检标本经消化浓缩后吸取其沉淀物作为培养材料。初次讣离，可用配氏培养基(见附录C中C1)、L—J培养基(见附录C中C2)或青霉素血液琼脂培养基(见附录C中C3)。

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