六、诊断鉴别
流行病学、临诊症状及病理变化等方面具有重要的诊断价值。但由于现在猪病种类繁多，且常常以非典型状态出现，甚至呈隐性感染，确诊猪瘟必须对病猪或特异性抗体进行实验室检测。一旦发现疑似猪瘟时，首先要采集病料，送往有关的实验室做抗原的确诊。现将几种主要的实验室诊断方法介绍如下：
(一)动物接种检测猪瘟病毒的敏感方法，应用易感的幼龄猪(10～20kg体重)进行接种试验。取病料或新鲜猪尸的血液或组织乳剂，肌肉注射接种1～2头幼猪。试验猪应事先进行血清中和试验，以排除有过猪瘟病毒或牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的感染。如果幼猪在接种后6～7天停食或体温升高，则立即采血分离病毒。幼猪发病死亡后，立即采取扁桃体、脾脏、淋巴结、肾脏等做病毒分离。如果幼猪在接种后21天不发病或发病后康复，则采血测定血清的中和抗体效价，并用强毒进行攻毒试验。从血液或组织中可分离到猪瘟病毒，被接种的幼猪产生中和抗体，对强毒攻击表现免疫性，即可判为阳性。相反，幼猪不发病，不产生中和抗体，对强毒攻击有易感性，则判为阴性。如果幼猪发病或死亡，但未分离出猪瘟病毒也不产生中和抗体，则应考虑其他病原感染的可能性。由于普遍存在低毒力的病毒株，所以被接种幼猪即使不呈现猪瘟症状，也应进行血液中的病毒分离试验。
(二)免疫荧光试验主要用于检测病毒抗原，是目前国内外实验室诊断猪瘟的最常用方法，结果直观、可靠。特别是在疫情初起必须查清病原、检疫及以猪场猪瘟净化时，此种检测方法尤为重要。
进行免疫荧光试验时，将待检病猪的扁桃体、肾脏、淋巴结、脾脏等组织的冰冻切片或抹片，或待检细胞培养片，经丙酮固定后，滴加猪瘟荧光抗体覆盖于切片、抹片或细胞片表面，置37℃作用30min，然后用磷酸盐缓冲液(PBS，pH7.2，0.01mol/L)洗涤，自然干燥后置荧光显微镜下观察。必要时，设立抑制试验染色片，以鉴定荧光的特异性。在荧光显微镜下，见切片、抹片或细胞培养物(细胞盖片)中有胞浆荧光，并由抑制试验证明为特异性荧光，判为猪瘟阳性反应；无荧光判为阴性反应。
必须指出，牛病毒性腹泻病病毒与猪瘟存在共同抗原性，因此，牛病毒性腹泻病病毒也能结合猪瘟荧光抗体。但因牛病毒性腹泻病病毒对猪并无明显的病原性，也不能在猪体内充分增殖，因此不至于干扰诊断结果，且因牛病毒性腹泻病病毒可在细胞培养物上引起细胞病变，鉴定并不困难。
(三)中和试验血清中和试验可以检出动物体内的抗体，但因推广应用弱毒疫苗，猪群中的猪瘟抗体滴度普遍较高，故应进行双份血清的检查(前后期相差14天以上)，才能确立抗体滴度增高与感染患病的关系。
目前最常应用的血清中和试验方法是免疫荧光中和试验，即用定量病毒加不同稀释度的被检血清进行试验。同时以SPF猪血清作为阴性对照，以猪瘟高免血清作为阳性对照。所有试验血清均经56℃灭活30min后，按下列步骤进行：用含0.5％乳白蛋白水解物和0.025mol/L的MgCl2•6H2O(即每1000mL中含有5.07g)的Earle氏液稀释病毒和被检血清。被检血清按4倍连续稀释法稀释，由1:4至1:1024。取不同稀释度的血清分别和等量病毒液混合，置37℃感作1h，随后接种飞片上的PK-15细胞培养物。同时设置各种对照组。再培养18～24h，取出后做免疫荧光抗体检查。计数各飞片中荧光细胞灶的数目。与对照组相比较，凡能减少90％荧光细胞灶的血清稀释度就是该血清的终点滴度。1:4血清组的荧光细胞灶减少不到90％者，判为阴性。
(四)琼脂扩散试验虽可选用病猪的脾、淋巴结和肠段为病料制备抗原，但以胰腺最好。另需要具备特异性好的猪瘟高免血清。本法操作简单，但敏感性较低，肯定是猪瘟病例的阳性检出率也低于50％。欧洲一些国家，如英国的某些诊断实验室专门制备高价免疫血清和抗原，并有统一的判定标准。
用pH8.6的巴比妥缓冲液配制1.2％琼脂，内加万分之一柳硫汞防腐。按中央1孔，周围6孔的模式打孔。孔径5mm，孔间距6mm。检测抗原时，将高免血清滴人中央孔内，周围孔内分别滴加标准抗原和待检病料乳剂。检测抗体时，将标准抗原滴人中央孔内，周围孔上、下2孔内滴加高免血清，其他4孔分别滴加被检血清。
|
