与其他检测技术比较,应用免疫胶体金快速检测技术时,样品不需要特殊处理,试剂和样本用量极小,样本量可低至1 μL~2 μL;既可用于抗原检测,也可用于抗体检测,检测时间大大缩短,也不需荧光显微镜、酶标检测仪等贵重仪器,试验结果可长期保存。但该技术一般作为定性,不易定量,大批量的集约性的操作,不如ELISA快而方便[6]。 2 免疫胶体金检测技术的研究 目前,国内外销售的金标免疫快速试验的成品多达几十种,但大多数成品是来自于国外进口或国内分装,同国外相比,目前国内这一领域的研究仍处于起步阶段,国内还没有国产材料制成的成型产品。由于金免疫结合试验的产品市场巨大,要在国内开展这一领域的研究,应尽快在国内建立起一套完整的工艺,研制出多品种、高质量的金标快速检测产品。金标试剂盒发展的方向主要体现在以下几个方面: 2.1 进一步提高检测灵敏度 金标免疫快速试验的灵敏性与ELISA基本相近,许多试验的敏感度都可达到1 ng/mL或更低水平,但是有些试验则不能达到如此的敏感度,灵敏度的提高无疑会拓宽胶体金免疫检测技术的检测范围。采用信号放大系统如生物素-链亲和素系统,应用链亲和素与生物素结合的四价性和极高的亲和常数,可明显提高灵敏度和稳定性[7]。 2.2 实现检测多元化 在同一膜上固定多种反应物,一次测定可同时得到一组结果。这对于检测某些具有联检意义的物质具有很大的应用价值。如乙型肝炎表面抗原、艾滋病病毒(Hmuan immunodeficiency virus,HIV)抗原和抗体(抗HIV/HIV-P24)以及丙型肝炎抗体的检测组合对筛选献血者会更为方便。弓形虫、巨细胞病毒和风疹病毒等抗体的检测在围产期检查中极为有用。 2.3 实现半量或定量检测 胶体金免疫测定时,当标本中受检物浓度超过试剂的敏感度时出现显色的阳性反应。这种测定较适用于检测正常体液中不含有的或含量极低而疾病时明显升高的物质,例如感染性疾病病原体的抗原或其相应抗体,妊娠时尿液中HCG等。在测定一般正常体液中存在而在疾病时升高的物质,若单纯以超过正常参考值上限为阳性界限,往往不能满足临床需求。虽然不论是DIGFA还是CGEIA,阳性显色的深浅与标本中受检物的浓度有一定的相关性,但由于试剂的原料和制作工艺很难使每一份试剂性质相同,因而同一浓度的受检物在各份试剂的显色深浅不尽相同。因此,如何实现半量或定量检测尚待进一步研究。 3 免疫胶体金技术在兽医学中的应用 3.1 免疫胶体金技术在禽病诊断中的应用 随着世界范围内养禽业的规模不断扩大,禽病对养殖的危害也随之加剧。对家禽疾病进行有效防治的关键是快速准确地进行诊断并弄清致病因子。伴随着病原检测技术的进步,免疫胶体金技术以其快速、简便、可单份检测、灵敏度高、特异性强、稳定性好、检测标本种类多等优点开始被逐渐应用于禽病的病原诊断[8]。郝桂兰等[9]利用免疫胶体金试验,采取病死鸽棉拭子样品30 min内即完成对一发病鸽群的快速鉴别诊断,排除禽流感病原,通过进一步的鉴定,结果该鸽群患的是禽Ⅰ型副黏病毒病。王长美等[10]用免疫胶体金试验诊断一发病率高、死亡快、疑似禽Ⅰ型副黏病毒感染的鹅病例,结果为禽流感阴性,根据临床症状和病变情况、免疫胶体金试验以及病毒分离和鉴定,证明该鹅群患禽Ⅰ型副黏病毒病,实现了对禽Ⅰ型副黏病毒病的快速鉴别诊断。王爱华等[11]选择15 nm的胶体金颗粒作为标记物,制备了鸡减蛋综合征病毒(Egg drop syndrome virus, EDSV)胶体金试纸条。该试纸条能检出浓度约为1.35 μg/mL的纯化鸡减蛋综合征病毒。程安春等[12]应用银加强胶体金探针检测提纯的鸡减蛋综合征病毒(EDSV)抗原的最低检出量为0.117 19 μg/mL,以此法检测了人工感染的50只鸡采集的样本,对卵巢、输卵管峡部、咽喉部、软壳蛋的阳性率均为100%,粪便阳性率为92%。王泽霖等[13]采用胶体金标记纯化的羊抗鼠IgG,建立了一种对鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)进行检测的银加强金标免疫技术(sliver-enhanced colloidal gold assay,SECGA),SECGA检测抗原可用IBV早期检测,具有群特异性、快速、敏感、简便、结果易判定。朱瑞良等[14]用免疫胶体金试纸膜进行快速检测传染性法氏囊病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)的研究,试验结果能够识别不同的IBDV毒株,包括强毒和弱毒,为IBDV的检测开辟了一条新的、快速的途径。
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