时间：2010-08-03 点击： 次 来源：阳光畜牧网 作者：阳光畜牧网 - 小 + 大
| 根据奶牛场隐性乳房炎的发病率情况，对广东省3个大型奶牛公司下属的奶牛场乳房炎奶样进行细菌的分离和鉴定，结果表明链球菌、葡萄球菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌占的比例最高，高达82.4%。同时对获得的致病菌株进行药敏试验，采用恩诺沙星和丁胺卡那霉素联合用药，其治愈率达到100%。本文采用高效液相色谱法对牛奶中恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星进行残留检测。 1 材料与方法 1.1 药物与试剂 盐酸环丙沙星对照品：含量为99.8%，批号为H010598，中国兽医药品监察所；恩诺沙星对照品：含量为100%，批号为H051200，中国兽医药品监察所；柠檬酸，乙酸铵，三乙胺(均为分析纯，天津市化学试剂一厂)；乙腈(色谱纯，香港Fisher Scientific公司)；甲醇(分析纯，广州化学试剂厂) 1.2 仪器与设备 高效液相色谱仪：产品号G1311A，系列号：DE14918471，配备四联泵、脱气泵、色谱工作站、荧光检测器、自动进样器和柱温箱，自动进样瓶，安捷伦科技有限公司生产；电子分析天平：AG204型，瑞士METTLER TOLEDO公司；离心机：EBA8S型，德国Hettich公司；微型混合器：MSI型，马来西亚IKA公司；多功能振荡器：HS250 Basic型，德国IKA公司；可调微量移液器：德国〖CM)〗EPPENDORF公司。 1.3 试液的配制 1.3.1 环丙沙星和恩诺沙星标准溶液的配制 环丙沙星标准液：准确称取盐酸环丙沙星对照品0.0116 g，置于10 ml棕色容量瓶中，以超纯水溶解，用甲醇定容至刻度，即成1 mg/ml的环丙沙星标准贮备液。恩诺沙星标准液：准确称取恩诺沙星对照品0.0100 g，置于10 ml棕色容量瓶中，以10%醋酸溶解，用甲醇定容至刻度，即成1 mg/ml的恩诺沙星标准贮备液。 1.3.2 流动相与提取液的配制 流动相包括水相和有机相两部分，水相为柠檬酸�乙酸铵缓冲液，有机相为乙腈。提取液为10%三氯乙酸甲醇溶液。 1.4 试验步骤 1.4.1 样品前处理过程 准确量取0.5 ml牛奶于2 ml离心管中，加入10 μl环丙沙星和恩诺沙星标准工作液，旋涡混合器上混合60 s，静置30 min。加入0.49 ml提取液，旋涡混合器上混合60 s以上，静置20 min。15 000 r/h离心10 min。吸取上清液，0.2 μm微孔滤头过滤至棕色自动进样瓶中，上机检测。 1.4.2 色谱条件和工作指标 检测器：荧光检测器，激光波长278 nm，发射波长465 nm；色谱柱：Hypersil BDSC18，5 μm，批号5/120/6706，大连依利特公司生产；流动相：水相/有机相=82/18；柱温：25℃；流速：1.0 ml/min；进样：HP1100型自动进样器进样，进样量为30 μl。 2 结果 2.1 色谱图 在上述色谱条件下能将环丙沙星、恩诺沙星与乳汁中其他组分分离开,环丙沙星、恩诺沙星的保留时间依次为6.2 min和8.3 min。乳样中各药物标准曲线回归方程及相关系数见表1。 2.2 乳中恩诺沙星、环丙沙星的回收率和变异系数 恩诺沙星在乳汁中的平均绝对回收率为97.29%，批间和批内的平均变异系数分别为2.29、3.35%，环丙沙星在乳汁中的平均绝对回收率为97.27%，批间和批内的平均变异系数分别为2.62%、4.61%，结果见表2。 2．3 乳中恩诺沙星及代谢产物环丙沙星的浓度 见表3、4。 |
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