复方秦皮提取液脱色工艺研究

时间：2010-05-15 点击：次来源：阳光畜牧网作者：阳光畜牧网 - 小 + 大

　　复方秦皮药物是西南民族大学生命科学与技术学院药理教研室田淑琴教授根据临床经验总结出的经验方经科学研制而成，该处方制剂为四川省科技厅及国家民委资助项目，项目名称为藏药“化结丹”临床前药理研究和藏药“黄百灵”临床应用调查（项目编号为川科委计（1999）9号和民委发（2002）127号）；并且于2006年3月22日获国家发明专利，处方主要由君药秦皮、臣药瞿麦等按一定重量配比制备而成。前期研究显示，复方秦皮药物对大肠杆菌K88具有很好的抗菌作用，治疗仔猪白痢的有效率和治愈率均为98%，治疗仔猪黄白痢的有效率和治愈率均在95%以上[1]，预防用药在发病前，效果明显，对肠道菌痢作用效果良好。但通过其最佳水提方法得到的提取液含杂质较多、颜色过深，给临床应用带来不便，所以我们就此问题进行了展开研究，以期待其能得到更加广泛的使用和更加充分的体现其临床疗效。
　　一、材料
　　复方秦皮（市售，配方由西南民族大学动物药理实验室提供）；无水乙醇（成都长联化工试剂有限公司）；医用活性炭（市售）；其他试剂均为分析纯。
　　HH-6数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）；SR-1605A电磁炉（尚朋堂股份有限公司）；AL201电子天平（METTLER TOLEDO，感量为万分之一）；TU-1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵（巩义市英峪予华仪器厂）；RE-3000旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；Eppendorf 5804高速离心机（德国生产）。
　　二、提取液的制备
　　（一）提取液的处理原理药材经水煎后，除有效成分被提出来以外，还浸出了淀粉、树脂、蛋白质、色素、无机盐等无效成分。此时，将提取液浓缩至每毫升相当于生药1~2g加入适量乙醇，可将杂质去除。通常淀粉在50%~60%的乙醇中即可沉淀，无机盐在60%乙醇中沉淀，蛋白质在75%以上的乙醇中才能沉淀。因此，我们采用三级醇沉的办法来将杂质去除。
　　（二）提取液制备按处方比例称取已经过粉碎的复方秦皮药材900g，混合均匀。按最佳水提工艺条件进行提取，即加入7倍量水，煎煮2次，每次90分钟。最后将药渣回流提取30分钟，合并药液。冷却，滤过，合并滤液，将滤液浓缩至每毫升相当于生药1~2g，加入无水乙醇使含醇量达到60%，将醇沉液4℃冷藏12小时，离心15分钟（5500r/min），取上清液，过滤，用旋转蒸发仪将药液浓缩，回收乙醇至无醇味；加入无水乙醇使滤液含醇量达到70%，将醇沉液4℃冷藏24小时，离心15分钟（5500r/min），取上清液，过滤，用旋转蒸发仪将药液浓缩，回收乙醇至无醇味；加入无水乙醇使含醇量达到80%，将醇沉液4℃冷藏36小时，离心15分钟（5500r/min），取上清液，过滤，醇液用1mol/ L NaOH溶液将pH值调至7.8，静置24小时，离心15分钟（7000r/min）取上清液，过滤，用旋转蒸发仪将提取液浓缩，回收乙醇至无醇味。过微孔滤膜（0.45μm），加适量蒸馏水烧沸后4℃冷藏24小时，得到提取液。
　　三、提取液脱色工艺研究
　　（一）脱色原理复方秦皮提取液中含有较多有色物质，使得溶液颜色较深，如不除去则为后续纯化操作带来麻烦。因此有必要对复方秦皮提取液进行脱色，我们选择医用活性炭进行脱色研究。通常用于中药提取液脱色的是粉末状活性炭，具有很强的吸附能力，可以将溶液中的有色物质吸附在表面上，从而达到脱色的目的。使用前活性炭需进行预处理，将适量粉末状活性炭（100~120目）于120℃下加热活化4~5小时，以除去所吸附的气体。
　　（二）脱色温度对吸收度的影响准确量取5份50ml的复方秦皮提取液于锥形瓶，各加入0.2%的已预处理活性炭粉末，搅拌下脱色30分钟，温度分别调节为20、40、60、80、100?C，脱色后抽滤除去活性炭，以蒸馏水为空白对照在349nm处测定吸收度[3]。
　　（三）脱色温度对提取液中有效成分的影响将（二）项下操作得到的五份提取液分别量取10ml，于已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干。于80°C真空干燥箱干燥3小时，置干燥器中冷却0.5小时，得到干膏。精密加入甲醇50ml将干膏充分溶解，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液1ml置25ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，以甲醇为空白对照在349nm处分别测定其吸收度，计算秦皮乙素的含量。
　　（四）脱色时间对吸收度的影响准确量取7份50ml的复方秦皮提取液于锥形瓶，各加入0.2%的活性炭粉末，在60?C搅拌脱色，时间分别设定为10、20、30、40、50、60、70分钟，脱色后抽滤，以蒸馏水为空白对照在349nm处测定吸收度。
　　（五）脱色时间对提取液中有效成分的影响将（四）项下操作得到的七份提取液分别量取10ml，按（四）项下操作，以甲醇为空白对照，在349nm处测定吸收度并计算秦皮乙素含量。
　　（六）活性炭浓度对吸收度的影响考虑到活性炭浓度过高对药物有效成分的吸附，依据有关文献，活性炭用于脱色的浓度适宜在0.1%~0.5%之间。准确量取5份50ml的复方秦皮提取液于锥形瓶，分别加入0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%的活性炭粉末。在60?C、20分钟条件下进行脱色，脱色后抽滤，以蒸馏水为空白对照在349nm处测定吸收度。
　　（七）活性炭浓度对提取液中有效成分的影响将（六）项下操作得到的五份提取液分别量取10ml，按（三）项下操作，以甲醇为空白对照，在349nm处测定吸收度并计算秦皮乙素含量。
　　（八）脱色温度对吸收度影响的测定结果
　　表1　脱色温度对吸收度影响的测定结果
脱色温度（?C） 20 40 60 80 100
吸收度 2.048 1.968 1.944 1.859 1.950

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