禽病实验室药敏检测流程与方法

禽病实验室药敏检测是评估病原菌对抗菌药物敏感性的重要手段，可指导临床合理用药。以下是其标准流程与方法的概述。

一、药敏检测基本流程

1.样本采集与处理

样本类型：病禽的病变组织（如肝、脾、肺）、血液、分泌物（气管拭子、泄殖腔拭子）或分离纯化的病原菌。

无菌操作：采集时避免污染，样本冷藏（4℃）或立即送检（2小时内）。

预处理：组织样本需研磨后悬浮于生理盐水或肉汤培养基中。

2.病原分离与鉴定

分离培养：根据疑似病原选择培养基（如血琼脂、麦康凯琼脂、支原体专用培养基）。

纯化培养：挑取单一菌落多次传代，确保菌株纯度。

鉴定方法：

形态学观察（染色镜检）；

生化试验（如氧化酶、糖发酵试验）；

PCR或基因测序（如16S rRNA鉴定细菌，特异性引物检测病毒或支原体）。

3.药敏试验方法选择

常用方法：

纸片扩散法（Kirby-Bauer法）：适用于快速筛选；

微量稀释法（MIC测定）：定量测定最低抑菌浓度；E-test法：结合纸片扩散和稀释法的优点，直接读取MIC值； 自动化药敏系统（如VITEK、Phoenix系统）：高通量检测。

4.药敏试验操作步骤

以纸片扩散法为例：

制备菌悬液：挑取纯培养菌落，用生理盐水或肉汤调至0.5麦氏浊度（约1×10⁸ CFU/mL）。

涂布平板：均匀涂布于M-H琼脂（细菌）或专用培养基（如支原体SP4培养基）。

贴药敏纸片：无菌镊子将药敏纸片间隔15mm贴于琼脂表面。

培养：细菌37℃培养16-24小时，支原体需延长至48-72小时。

结果判读：测量抑菌圈直径，参照CLSI（美国临床实验室标准化协会）或EUCAST标准判定敏感（S）、中介（I）、耐药（R）。

5.结果分析与报告

记录各药物抑菌圈直径或MIC值，生成药敏谱。

结合临床用药习惯、药物代谢特性（如组织穿透性、半衰期）提出用药建议。

二、常用药敏检测方法详解

1.纸片扩散法

优点：操作简单、成本低，适合基层实验室。

局限性：无法定量，对慢生长菌（如支原体）灵敏度低。

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