规模化养殖场口蹄疫疫苗免疫案例分享

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的，通过牛、羊、猪等偶蹄动物传播，呈现明显发热症状，并具有高度接触和远距离快速传播的动物疫病。该病的发病率接近100%，成年动物的死亡率较低且一般可控。 仔猪主要因出现急性胃肠炎和致死性心肌炎，死亡率高达70%左右，断奶前幼畜死亡率可高达100%。

我国目前采取以免疫为主的综合防控措施进行口蹄疫防控。由于口蹄疫病毒容易发生变异导致新毒株不断出现，所以，在对动物进行疫苗免疫时，应了解当地口蹄疫流行情况，免疫与当地流行毒株匹配的疫苗，才能有效防控口蹄疫，使疫苗发挥更大的作用。

免疫抗体是衡量疫苗免疫效果的重要指标。目前，国际粮农组织（FAO）和世界动物卫生组织推荐液相阻断ELISA方法来对口蹄疫疫苗免疫效果进行评价。研究与实践表明，口蹄疫液相阻断ELISA抗体检测技术具有良好的敏感性、快速诊断性和可重复性，与攻毒保护有很好的相关性，现被广泛应用于口蹄疫免疫抗体水平的监测。液相阻断ELISA方法专为检测FMD全病毒抗体设计，针对完整病毒粒子的抗原位点进行抗体定性定量检测，通过对被检血清的倍比稀释，定量测定血清中抗体含量的高低，从而真实反映出免疫后机体抵御病毒侵入的能力。疫苗免疫以后，为了掌握疫苗免疫对猪群的保护力，需要抽检样品检测抗体，对免疫水平进行评价。

一、材料与方法

（一）疫苗

某企业猪口蹄疫O、A型二价灭活疫苗。

（二）实验器材

单道、12道移液器若干，96孔U型反应板若干，37℃恒温生化培养箱、100ml量筒、iMark-酶标仪。

（三）血清样品

福建某养殖场提供50日龄、60日龄、80日龄、110日龄、140日龄商品猪血清各20份。该规模化养殖场口蹄疫疫苗的免疫程序为：母猪一年普免三次；仔猪90日龄免疫一次。

（四）检测试剂盒

口蹄疫O型、A型液相阻断抗体检测试剂盒，购自兰州兽研生物有限公司。图片（五）实验方法及判定标准

采用液相阻断ELISA测定免疫动物血清中口蹄疫特异性抗体，具体方法如下：

1.待检血清稀释按50ul每孔用PBST做1:16开始的2倍稀释至1:128，每孔加入50ul稀释至规定浓度的口蹄疫病毒灭活抗原，对照孔加100ul，振荡混匀，4℃过夜。

2.过夜后，将抗原抗体板上的液体按每孔50ul转移到包被0型口蹄疫病毒兔抗的ELISA反应板上，37℃避光温育60min。

3.弃去各孔中液体，甩干。每孔加满PBST清洗液，静置约30s，重复5次，拍干，每孔加入50ul口蹄疫病毒豚鼠抗体工作液，37℃避光温育30min。

4.弃去各孔中液体，甩干。每孔加满PBST清洗液，静置约30s，重复5次，拍干，每孔加入50ul口蹄疫病毒兔抗豚鼠抗体酶结合物工作液，37℃避光温育30min。

5.弃去各孔中液体，甩干。每孔加满PBST清洗液，静置约30s，重复5次，拍干，每孔加入50ul显色液（TMB底物A、B溶液按1:1混匀），37℃避光温育15min。

6.每孔加入50ul终止液，读取OD450nm值。

7.结果判定：以抗原抗体对照平均OD450nm的50%为临界值，被检血清稀释孔OD450nm的值大于临界值，抗体滴度为＞1:128；小于或等于临界值，抗体滴度为﹤1:32；若临界值处于两个滴度之间，应取中间值。

二、结果

60日龄商品猪的口蹄疫O型、A型免疫抗体合格率分别为60.00%、80.00%，80日龄商品猪的口蹄疫O型、A型免疫抗体合格率分别为60.00%、90.00%，其它群体免疫抗体合格率都能达到100.00%（详细结果见下图表）。

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