非洲猪瘟抗体“假阳性”的解决方案
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图1 竞争ELISA（或通过计算公式为阻断法）抗体检测原理图 ①血清学检测配液和洗涤必须用超纯水。较差的水质带有杂质或者某些离子会导致螯合反应，继而有可能影响二抗的结合。 ②抗凝管中肝素抗凝，分离的血浆会增加OD值,可能与高浓度肝素具有强大的负电荷,能吸附酶标记物不易洗脱有关。 溶血、血样呈胶冻状，可能产生螯合反应（也可能就是一种非特异性结合）封闭其抗原表位，进而影响了二抗的结合。 ③样本合样后导致的假阳性可能是一种凝集反应。打一个不恰当的比喻，我们都知道不同血清型的人输血有可能出现严重的凝集反应，单个血清中其pH值，和蛋白之间的结合是一个稳态；但当合样后，两种或多种血清之间会发生蛋白间的相互作用或化学反应，形成螯合物有可能覆盖了表位，导致部分二抗无法结合，接近临界值就成为假阳性。 （3）试剂盒的检测敏感性与假阳性的矛盾可能是很难调和的。我们都知道国外是将非洲猪瘟抗体检测试剂用于区域净化的，这就要求更高的敏感性，为了提高敏感性将判定阈值线（cutoff）降低就可能是其中的选项之一。与之类似的是伪狂犬病gE抗体检测试剂，当把阴阳性阈值线调低了之后，会增加假阳性的几率，这也是下文的解决方案中需要做数据分析的原因。 三、不同场景下试剂盒的选择 实验室根据不同场景和不同目的，准备不同的抗体检测试剂盒进行检测和监测。 （1）引种监测（场内还存在生产群）时，因隔离时间短，需要更为敏感的试剂盒，才能在刚感染时及时发现，避免路途中感染的风险。 （2）阴性场或大环境压力较小的规模场，需要用敏感性中等的试剂盒作定期监测，避免因误诊，增加一线人员的工作强度。 （3）发生问题的猪场，在部分清群后，需要用更敏感的检测试剂盒进行监测。 四、如何鉴别假阳性或假阴性 一个假阳性的出现可能会导致猪场进入战时状态，进而打乱猪场的生产节律，会给阴性场造成不必要的巨大损失，因此实验室和兽医团队在上报异常样本时，需同时开始复检。可通过以下措施降低假阳性或避免假阴性。 |
