细菌培养与药敏试验方法及其在临床的应用

临床微生物诊断主要是为感染性疾病是否有细菌性感染提供快速且有效的信息。细菌分离培养主要用于临床标本中细菌的分离，通过分离，使细菌在平板上分散生长，便于观察菌落特性，也易于挑取单个菌落进行药敏试验或生化鉴定；测定抗菌药物在体外对病原微生物有无抑菌或杀菌作用的方法被称为抗菌药物敏感性试验，简称药敏试验。各种致病菌对不同抗菌药的敏感性不同，同种细菌的不同菌株对不同抗原药物的敏感性也有差异，而由于抗菌药物的广泛使用所产生的选择性压力，使耐药菌株也随之增加。通常细菌培养需要至少24~72小时，很多临床病例无法等待这么长的时间之后再进行治疗，那么，对于一些较为特定的临床症状，特定的病原菌，以及特定的药物敏感性的了解，建立一个细菌培养与药敏试验数据库往往能为前期用药的准确度提供一定的依据，同时，这种诊断的准确度又需要通过细菌培养、药敏试验来进行确定，在进行细菌培养之前，需要注意采样方法，样本质量，并提前对样本进行显微镜检查。

1  细菌培养

1.1  细菌培养前注意事项

在细菌培养之前,对潜在感染样本进行直接显微镜检查是一项重要且有效的检查，有时可获得细菌的数量、形态以及革兰氏染色特征，当样本细菌量达到104~105/mL时，样本所含细菌较易被检查出来。但对于脑脊液或血液等，因为即便感染细菌量可能也比较少，显微镜检查不易检出，同时，对于一些细菌如支原体或螺旋体，因为常规染色无法很好的着色，也不易检出。对于这些情况，需要进行细菌培养以确定。

细菌培养的样本一般为组织、棉拭子、血液、穿刺液、渗出液、尿液、粪便等，不同的样本需要不同的采样方式，或者不同时间的样本。需注意的是，采样前，确保准确的位置，同时注意消毒（图1）。

图1 细菌培养采样区域

在送检样本时，除了提供完整的样本信息，病史等，还需保证样本能够及时送检到相应的实验室，用于盛装样本的容器一定是无菌的，且在运输过程中，需保证无其他细菌感染且细菌相对数量不会改变。尽量在使用抗生素之前或者下次使用抗生素之前采集样本，尽量避免药物作用。

1.2  细菌培养过程

细菌培养的基本条件包括培养基，培养箱，接种用具，无菌室及生物安全柜。

1.2.1  培养基的选择：细菌培养的培养基包括化学培养基、基础营养培养基、富含营养培养基、厌氧培养基、选择培养基以及鉴别培养基，不同培养基具有不同的作用，一般临床分离细菌的常规培养基主要是血平板培养基（blood agar）和麦康凯培养基（MacConkey agar），临床常见培养基及其用途如表1。

表1  常见培养基用途

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