免疫奶牛群布鲁氏菌病的实验室诊断

         布鲁氏菌病（简称布病）是一种人畜共患传染病，可导致动物流产、不育和各种组织的局部病变,可引起人波浪热、关节炎、神经痛、肝脾肿大、睾丸炎、附睾炎和孕妇流产。该病不仅给畜牧业生产造成巨大经济损失，而且给消费者带来严重的公共卫生威胁。布鲁氏菌病难预防、难根除、易反复发作难治愈，人类对该菌易感，目前还尚无良好疫苗预防本病，该病受到各国政府及医学、兽医学工作者的高度重视，随着世界贸易市场的不断拓宽，世界优势品种动物的流通和交流逐步加深，这给该病的诊、检、防带来很大的挑战。自2004年以来，该病畜间、人间的发病率均呈上升趋势。2004上半年我国报告布病发病5 753例，已接近2003年全年发病人数，疫情形势十分严峻。目前我国用于布病诊断的常规技术有病原分离、PCR检测和血清学诊断。血清学诊断主要用虎红平板凝集试验（RBT，敏感性21%~98.3%，特异性68.8%~100%）、试管凝集试验（SAT，敏感性29.1%~98.3%,特异性99.2%~100%）和补体结合试验(CFT，敏感性23.0%~97.1%，特异性30.6%~100%)等。前两种诊断方法都会出现一定比例的假阳性和假阴性，特别是SAT用于牛布病检测时结果不令人满意，OIE于2000年宣布不主张将其用于国际贸易。自 2007年春季开始，我市使用猪型2号布病疫苗（S2）对牛、羊实行普防，免疫程序为1次/1.5年，为鉴别奶牛免疫抗体和感染抗体，我们进行了平板凝集、试管凝集、ELISA和PCR检测的对比试验，以便为当前布病诊断提供参考。
       一、材料与方法
       （一）试验样品 血清样本采自奶牛养殖场或散养户，共1028份；流产胎儿的羊水17份、抗凝血60份采自某奶牛场。
       （二）诊断试剂 琥红平板凝集、试管凝集试剂购自中国兽药监察所；布氏杆菌抗体竞争ELISA监测试剂（Brucella-Ab C-Elisa）购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司（为瑞典SVANOVIR公司生产）；布病PCR试剂购自索奥生物制品有限公司。
       （三）试验方法 琥红平板凝集、试管凝集试验按GB/T 18646执行；布氏杆菌抗体竞争ELISA试验和布病PCR试验方法按说明书执行。
       二、结果
       （一）免疫奶牛群布病抗体阳转率调查 为掌握免疫后奶牛阳转率的规律，为鉴别苗毒与野毒感染奠定基础，我们在3个连续3年布病检测均为阴性的奶牛场采用RBT法开展了免疫抗体跟踪监测。检测结果见表1。
        监测结果表明，布病疫苗免疫后前3个月平板凝集抗体消减速度较快，此后消减速度减缓，免疫后至少半年内用平板凝集实验不能区分免疫与感染抗体。

表1  布病免疫后平板凝集阳转率一览表       单位：头

          （二）RBT、SAT和c-ELISA检测结果对比 检测样品共260份，均来自布病免疫后13~16个月的奶牛，其中150份采自全市18个奶牛养殖场，110份采自散养户。

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