疫病监测

兽医实验室诊断--动物蠕虫检查

日期:07-19 作者:阳光兽医- 小 + 大

        (一)粪便检查
        1.蠕虫虫体检查法粪便中的节片和虫体,其中较大型者,很易发现,对较小的,应先将粪便收集于盆(或桶)内,加入5~10倍的清水,搅拌均匀,静置待自然沉淀,而后将上层液体倾去。重新加入清水,搅拌沉淀,反复操作,直到上层液体清澈为止。最后将上层液倾去,取沉渣置于大玻皿内,先后在白色背景和黑色背景上,以肉眼或借助于放大镜寻找虫体,有所发现时,用铁针或毛笔将虫体挑出供检查。
        2.虫卵检查法又分涂片检查法和集卵法。
       (1)直接涂片检查法本法是先在载玻片上滴一些甘油与水的等量混合液,再用牙签或火柴棍挑取少量粪便加入其中,混匀,夹去较大的或过多的粪渣,最后使玻片上留有一层均匀的粪液,其浓度的要求是将此玻片放于报纸上,能通过粪便液膜模糊地辨认其下的字迹为合适。在粪膜上覆以盖玻片,置显微镜下检查。
        (2)集卵法本法原则是利用各种方法,将分散在粪便中的虫卵集中起来,再行检查。所采用的方法一般有两种,其一是利用虫卵和粪渣中其他成分的比重的差别将其集中。虫卵的比重一般比水略重,但轻于饱和食盐水(在1000mL水中加食盐380g,比重约1.18)。这样,当粪便中的虫卵在水中时则沉于水底,而粪便中的一些饲料纤维和可溶性物则混于或溶于粪液中。当粪便以饱和盐水稀释时,虫卵则漂浮于溶液表面,而有些较重的粪渣则下沉于 底部。这样根据虫卵在不同液体中沉或浮的情况,而采取沉渣或浮起物检查,就可以在其中检查到比较多的虫卵,从而提高检出率。但各种虫卵常具有不同的比重,一般吸虫卵比重最大,在各种溶液中多数不能浮起;而有些虫卵(如猪的后圆线虫卵)在饱和食盐水中不能浮起,但可以用一些比重更大的溶液(如硫代硫酸钠溶液——1000mL水中加硫代硫酸钠1750g,比重在1.4左右)使之漂浮。此外,被采用的还有饱和硫酸镁溶液、饱和硫酸锌溶液、硝酸铅溶液、饱和糖溶液和甘油等。但也应注意到,除了特殊的需要外,采用过大比重的溶液也是不适宜的,因为加大了比重会浮起更多的粪内杂质,反而影响检出率,有时比重的加大会同时出现黏稠度的增加,使虫卵浮起的速度减缓。 另一种使虫卵集中的方法是筛滤法,即利用孔径大小不同的金属筛,过滤粪液。目前常采用260目的锦纶筛兜过滤粪液,过滤时大部分虫卵被留于筛上,然后取筛内物检查。根据以上两种方式为基础,已有多种具体的方法被采用,较常用的有如下数种:
        ①沉淀法取粪便5g,加清水100mL以上,搅匀成粪液,通过40~60目铜筛过滤,滤液收集于三角烧瓶或烧杯中,静置沉淀20~40min,倾去上层液,保留沉渣,再加水混匀,并沉淀,如此反复操作直到上层液体透明后,吸取沉渣检查。适于检查吸虫卵。
       ②漂浮法取粪便10g,加饱和食盐水100mL,混合,通过60目铜筛,滤入烧杯中,静置半小时,则虫卵上浮;用一直径5~10mm的铁丝圈,与液面平行接触以沾取表面液膜,抖落于载玻片上检查。此法又称费勒鹏法。此法适用于线虫卵的检查。在检查比重较大的后圆线虫卵时,则可先将猪粪按沉淀法操作,取得沉渣后,在沉渣中 加入饱和硫酸镁溶液,进行漂浮,收集虫卵。
        ③锦纶筛兜集卵法取粪便5~10g,加水搅匀,先通过40或60目的铜丝筛过滤;滤下液再通过260目锦纶筛兜过滤,并在锦纶筛兜中继续加水冲洗,直到洗出液体清澈为止;而后挑取兜内粪渣做抹片检查。此法适用于宽度大于60μm的虫卵,通过以上处理,粗大粪渣被铜筛扣留,纤细粪渣(直径小于40?m)和可溶性色素均被冲洗走而使虫卵集中。
        (3)虫卵计数法:虫卵计数法是测定每克家畜粪便中的虫卵数,而以此推断家畜体内某种寄生虫的寄生数量,有时尚以使用驱虫药前后虫卵数量的对比,以检查驱虫效果。虫卵计 数的结果,常以每克粪便中虫卵数(简称e.p.g)表示,目前常用的方法如下:
       ①斯陶尔氏法:在一小玻璃容器上(如小三角烧瓶或大试管),在容量56mL和60mL处各做一个标记;先取0.4%的NaOH溶液注入容器内到56mL处,再加入被检粪便使液体升到60mL处,而后加入一些玻璃珠,振荡使粪便完全破碎混匀;而后在混匀的情况下以1mL的吸管吸取粪液0.15mL,滴于2~3张载玻片上,覆以盖玻片,在显微镜下循序检查,统计其中虫卵总数(注意不可遗漏和重复)。因0.15mL粪液中实际含原粪量是0.15×4/60=0.01g, 因此所得虫卵总数乘100即为每克粪便中的虫卵数。本法适用于大部分蠕虫卵的计数。
        ②麦克马斯特氏法:操作方法是取粪便2g,放于乳钵中,先加水10mL,搅匀,再加饱和盐水50mL。混匀后,吸取粪液,注入计数室,置显微镜台上,静置1~2min。然后在镜下计数一平方厘米刻度中的虫卵总数;求两个刻度室中虫卵数的平均数,乘以200即为每克粪便中的虫卵数。本法只适用于可被饱和盐水浮起的各种虫卵。

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