|
鸡白血病特别是J亚型白血病（俗称血管瘤）在我国的快速传播，给养鸡业造成了极大的损害，对全国的鸡育种体系建设也形成了巨大的威胁。客观形势的发展使得广大种鸡场对白血病的诊断特别是快速诊断工作提出了很高很迫切的要求。今结合种鸡场的生产实际，就鸡白血病的有关诊断方法进行评述，并对白血病快速诊断产品研发提出一些新的思路，以供参考，以求引玉。
1、现在的诊断方法
现在鸡白血病的诊断方法主要有以下几种：一是病毒分离法；二是组织病理诊断法，目前已有很好的单克隆抗体免疫组化染色法；三是血清学诊断，目前主要的是ELISA（酶联免疫吸附试验）法；四是PCR（聚合酶链式反应）法。
1、1病毒分离鉴定法
分离各亚型白血病病毒是很基础性的工作，也是确诊的重要手段。对于研究病毒的各种特性、机理和研发相关疫苗与药物等都具有很重要的意义。对于自国外引进种鸡的国家来说，一旦暴发白血病，其病毒的分离工作，对于追查病毒的来源具有特别重要的意义。
分离白血病病毒大体需要以下几个步骤：一是制备鸡胚成纤维细胞（CEF），有时为了排除内源性病毒的干扰，需制备对内源性病毒有抵抗作用的细胞或细胞系；二是病料的处理和接种；三是病毒的检测。
这种方法对诊断来说，结果最确切。不利之处，一是时间长，一般需要十几天甚至更长的时间；二是需专业设备、专业人员、专门试剂材料等；三、成本很高，成功率不太高。本方法单对诊断来说，并不是好的选择。一般实验室没有这个能力，绝大多数种鸡场也不具备应用能力。
1、2组织病理诊断法
常用的方法是对HE（苏木精—伊红）染色切片进行显微观察。观察特征性的肿瘤细胞、肿瘤结节及细胞核与细胞浆变化。目前已大量使用的方法是，利用白血病病毒的特殊单克隆抗体使用细胞免疫组化染色法进行检测，这种方法可以直接确定各种组织中的瘤细胞病变与何种白血病病毒的关系，是一种很确切的方法。还有进一步利用组织芯片与免疫组化染色相结合来检测的方法。
还有一种方法就是间接荧光抗体法（IFA），就是用单抗或单因子血清和异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗小鼠或抗鸡Ig抗体做间接荧光试验，在荧光显微镜下观察有关呈病毒特异性荧光的细胞。这也是一种结果较确切的方法。
这些方法需要专门的实验室、专门的设备器材及专业的人员，带有很强的科研性质，大多种鸡场无法做这些工作，而且对种鸡的（提前）净化来说有严重的滞后性（肿瘤早已形成），在种鸡场实际生产中利用价值不大。
1、3 血清学诊断
国外在六十年代采用禽白血病补反检测方法，该方法敏感但操作复杂。我国八十年代开始采用检测羽髓的琼脂扩散试验（AGP），该方法适合大面积操作，在我国种鸡净化方面曾起到很大作用。利用白血病病毒有关基因重组产物作抗原也能很好地对白血病抗体进行检测。
目前进行应用最广泛的是ELISA（酶联免疫吸附试验）法。该方法既可做白血病各亚型的抗体检测，也可做病原检测。其使用大体过程包括样本准备、洗涤液准备、具体操作、结果判定（阳性阴性）等。ELISSA商品化的产品多为白血病A、B、J亚型的抗体检测和群特异型的P27抗原检测。目前的科研发展已完全可以做出白血病各亚型的抗原检测的产品。
ELISA检测，仍有一些未解的问题，如抗体检测中的雏鸡早期阳性率过高问题，有人认为是产品的适用性问题，也有的认为是内源性病毒部分表达所引起的干扰，目前尚有争论。另外就是检测抗原时所出现的内源性病毒的干扰问题，一是对产蛋种鸡可以用含内源性病毒较少的蛋清来检测，二是将来可以选用特殊的对白血病内源性病毒不发生反应的白血病病毒单克隆抗体来做产品检测原料，从而在检测中避开内源性病毒的干扰。
在种鸡场的实际生产中，一少部分大型种鸡场已开始进行白血病的ELISA检测，大多数种鸡企业未进行此项工作。所以上游的原种鸡场、祖代鸡场不进行相应的检测，一旦发生白血病，疾病就会沿育种体系链逐级放大、肆意流行，许多下游的父母代种鸡场和商品代养殖场损失就会甚为惨重。相关数据显示，如果不进行白血病检测和阳性种鸡淘汰工作，一个祖代场的白血病感染率是5‰左右，其下游父母代种鸡场则为5﹪以上，再下游的商品代养殖场就会达到10~40﹪。
造成我国育种体系中大多数上游种鸡场对白血病不加检测原因，一是相关试剂目前几乎全部来自国外，价格昂贵，一些种鸡场承担不起；二是此方法需专门场所、专门设备和专门的人员，需要不少的投入，检测时间也需几个小时，做大面积的检测所投入的人力成本也很高；三是一些企业本身对此病的检测重视不足。解决这些问题，一要支持和加快相关产品的国产化；二是国内研发者要适应产品的商品化要求和商业化模式，在科研产品的商品化和商业化操作问题上要特别注意产品的灵敏度、稳定性、有效期与持续性技术服务等问题；三是种鸡企业也要加强对相关疾病检测的重视。
|
