疫病监测

家禽血清样品的采集与保存

日期:09-23 作者:邢清洁- 小 + 大

邢清洁  河北省内丘县农业局 (河北 内丘 054200)

    在重大动物疫病防控中,免疫效果起着举足轻重的作用,而在免疫效果监测中,样品的采集方法、数量和质量直接决定着监测结果的准确性和监测结论的科学性。因此,在实际操作中,应该掌握科学的采样方法,避免可能影响血样质量的操作。
    1 采样前的准备
    1.1采样器具准备 采样箱、保温箱或保温瓶、封口膜、封条、冰袋、酒精棉、5ml一次性注射器、塑料离心管(2ml)、易封口样品袋、塑料包装袋等。
    1.2采样记录用品 不干胶标签、签字笔、记号笔、采样单等。
    1.3人员防护用品 口罩、一次性手套、乳胶手套等。
    2 选择合适的时间 为保证监测的科学性,应在家禽免疫后14天开始采集样品;采样前,家禽最好禁食8小时。
    3 采样数量和剂量 为使样品具有一定的代表性,应在同群中随机采样,每群采集血样20-30份,每份全血在3ml左右。
    4 常用采血方法
    4.1雏禽采血 雏禽多采用心脏采血。左手抓鸡,右手持采血针,平行颈椎从胸腔前口插入,回抽,有血液回流时,将针芯向外拉使血液流入针管。
    4.2青年禽和成年禽的采血
    4.2.1翅静脉采血 侧卧保定禽只,在翅下静脉处,用酒精棉球消毒,使一次性注射器从无血管处向翅静脉丛刺入,有血液回流,将针芯缓慢外拉使血液流入针管。
    4.2.2翼根采血 侧卧保定禽只,展开翅膀,露出腋窝处,拔掉羽毛,用酒精棉球消毒。拇指按压近心端,待血管怒张后,用5ml一次性注射器,由翼根向翅方向平行刺入静脉,放松对近心端的按压,外拉真芯缓慢抽取血液。
用注射器抽取血液时,要防止静脉塌陷和出现气泡。采血完毕,用干棉球按压止血,以防血液外流。
    4.2.3心脏采血
    4.2.3.1侧卧保定采血 助手抓住禽两翅和两腿,右侧卧保定,在触及心搏动明显处,或胸骨脊前端至背部下凹处连线的1/2处消毒,垂直或稍向前方刺入2-3厘米,回抽见有回血时,把针芯外拉使血液流入采血针管。
    4.2.3.2仰卧保定采血 胸骨朝上,用手指压离嗉囊,露出胸前口,用装有长针头的注射器,将针头沿其锁骨俯角刺入,顺着体中线方向水平穿行,直到刺入心脏。
    5 血清分离
    5.1在室温下阴凉处倾斜放置2-4小时,待血液凝固后自然析出血清。
    5.2用无菌玻璃针剥离血凝块,将试管放在装有25-37°C温箱内1小时或置于4°C冰箱内过夜。
    5.3用离心机以1500-2000转/分离心5分钟,分离血清。
    如果在一次性注射器中自然析出血清,注射器中应吸入1-2毫升空气。待大部分血清析出后,将血清移到小塑料离心管中,盖紧盖子,封口,贴标签。 
    6 样品的记录
    采样时,要认真填写采样单,包括场名、畜主、日龄、联系人、电话、存栏数量、采样数量、样品名称、编号、免疫情况等。
    采样单用钢笔或签字笔逐项填写,样品标签和封条用签字笔填写,保温容器外封条用钢笔或签字笔填写,小塑料离心管用记号笔标记。样品与采样单一一对应,采样单装在塑料包装袋内,并随样品送实验室。
    7 样品的包装
    每个血清样品要单独包装,分装在不同的小塑料离心管中或小瓶中,一一编号,同群样品再用样品袋包装,样品袋外粘贴标签,标签注明样品名、样品编号、采样日期等。
    8 血清保存与运输
    8.1保存 血清应冷藏或冷冻保存。采集样品后,如果能在短时间内送达实验室,则可以放在4°C左右的容器中运送;需长期保存的,将血清置于-20°C冷冻。2-8°C条件下,血清可保存15d;-15°C以下可保存2年。
    8.2运输 为避免样品泄漏,应将样品容器密闭后装在保温瓶或箱中运输。如需寄送,将装样品的容器放到更大的具有坚实外壳的容器内,并垫上足够的缓冲材料。
所有样品都要贴上详细标签,内附填写完整的采样单。
    8.3解冻 血清不宜反复冻融。反复冻融会使血清中的脂蛋白和纤维蛋白变性,导致出现絮状沉淀物。血清从低温冰箱取出后,最好经4°C冰箱、室温、37°C水浴条件逐步均匀溶解,待血清完全溶解后再用。

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