4 动物布病试管凝集试验 4.1 材料准备 4.1.1 稀释液 0.5%石炭酸生理盐水。检验羊血清时用含0.5%石炭酸的10%盐溶液,如果血清稀释用含0.5%石炭酸的10%盐溶液,抗原的稀释应用含0.5%石炭酸的10%盐溶液。 4.1.2 抗原、阳性血清和阴性血清由制标单位提供,按说明书使用。 4.1.3 凝集试验管(三分管)、试管架、吸管及温箱。 4.2 操作方法 4.2.1 按常规方法采血分离血清。 4.2.2 运送和保存血清样品时防止冻结和受热,以免影响凝集价。若3d内不能送到实验室,按每9mL血清加1ml 5%石炭酸生理盐水(徐徐加入)防腐,也可用冷藏方法运送血清。 4.2.3 受检血清的稀释 以羊和猪为例,每份血清用4支凝集试管。 4.2.3.1 第一管标记检验编码后加1.15mL稀释液。 4.2.3.2 第2—4管各加入0.5mL稀释液。 4.2.3.3 然后用1ml吸管取被检血清0.1mL;加入第1管内,并混合均匀。混合方法是将该试管中的混合液吸人吸管内,再沿试管壁吹入试管中,如此吸入、吹出3—4次,充分混匀后以该吸管吸混合液0.25ml弃去, 4.2.3.4 取0.5mL混合液加入第2管,用该吸管如前述方法混合。 4.2.3.5 再吸第2管混合液0.5mL至第3管,如此倍比稀释至第4管,从第4管弃去混匀液0.5mL。 4.2.3.6 稀释完毕,从第1至第4管的血清稀释度分别为1:125、1:25、1:50和1:100。 4.2.3.7 牛、马、鹿、骆驼血清稀释法与上述基本一致,差异是第一管加1.2mL稀释液和0.05mL被检血清。 4.2.3.8 将0.5mL20倍稀释的抗原加入已稀释好的各血清管中,并振摇均匀,羊和猪的血清稀释则依次变为1:25、1:50、1:100和1:200,牛、马和骆驼的血清稀释度则依次变为1:50、1:100、1:200和1:400。 大规模检疫时也可只用2个稀释度,即牛、马、鹿、骆驼用1:50和1:100,猪、山羊、绵羊和狗用1:25和1:50。 4.2.3.9 置37℃—40℃温箱24h,取出检查并记录结果。 4.2.3.10 每次试验均应设阳性血清、阴性血清和抗原对照,即 a)阴性血清对照:阴性血清的稀释和加抗原的方法与受检血清同。 b)阳性血清对照:阳性血清须稀释到原有滴度,加抗原的方法与受检血清同。 c)抗原对照:1:20稀释抗原液0.5mL,再加0.5mL稀释液,观察抗原是否有自凝现象。 4.3 判定 4.3.1 供判定参照比浊管制备方法见附录E(提示的附录)。 4.3.2 结果判定 4.3.2.1 凝集反应程度分为: 参照比浊管,按各试管上层液体清亮度判读 a)++++菌体完全凝集,100%下沉,上层液体100%清亮; b)+++菌体几乎完全凝集,上层液体75%清亮; c)++菌体凝集显著,液体50%清亮; d)+凝集物有沉淀,液体25%清亮; e)—凝集物无沉淀,液体均匀混浊。 4.3.2.2 牛、马、鹿和骆驼1:100血清稀释,猪、山羊、绵羊和狗1:50血清稀释,出现“++”以上凝集现象时,受检血清判定为阳性。 |
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