疫病监测
恩诺沙星对雏鸭体内大肠杆菌抗菌作用观察
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恩诺沙星广泛应用于兽医临床，尤其对革兰氏阴性菌具有很强的抗菌活性。此类药物抗菌活性的研究主要是进行体外抑菌试验和药效学研究。前者是在人工培养基上进行，其结果虽具一定参考价值，也有一定局限性；后者在多数情况下是以一两种剂量进行。研究抗菌药物的体内抗菌活性，对评价不同药物以及同一药物不同制剂的临床疗效更具实际意义。为此，在体外药敏试验的基础上，以人工诱发雏鸭大肠杆菌病为模型，测定了恩诺沙星混悬剂对大肠杆菌体内抗菌活性，并同恩诺沙星普通注射剂和常用药物阿米卡星进行对比。 1 材料与方法 1.1 药品与试剂 恩诺沙星对照品(广东养宝生物制药有限公司提供)，按实际含量配制成1280 mg/L水溶液用于体外药敏试验；恩诺沙星注射混悬剂按文献方法制备，经测定药物含量为40.4 g/L；恩诺沙星注射剂(广东海康兽药厂)；阿米卡星(广东养宝生物制药有限公司提供)。 1.2 动物与菌株 仙湖三号肉鸭由佛山科学技术学院科研禽场提供，饲养至15日龄开始实验。大肠杆菌O78由中国兽医药品监察所提供。 1.3 方法 1.3.1 菌液稀释 将增毒后的大肠杆菌在实验前1天接种于2 ml营养肉汤中，37℃孵育6 h，取0.1 ml转种10 ml营养肉汤中，37℃孵育18 h，为实验用原菌液。将原菌液用生理盐水稀释至感染动物所需浓度。 1.3.2 药物稀释 采用等比系列稀释法，恩诺沙星混悬剂用相应的溶媒稀释，恩诺沙星注射剂和阿米卡星注射剂用注射用水稀释。高低剂量组药物浓度比值为1∶0.75。 1.3.3 感染动物保护实验 将实验动物按体重均衡随机分组，每组10只，肌肉注射菌液感染雏鸭，每只鸭注射菌量为1 MLD(预试中测定)，每只动物感染后即刻肌肉注射给药2 ml/kg，连续观察7天，记录感染后雏鸭的症状及死亡数。 1.3.4 数据处理 恩诺沙星混悬剂、恩诺沙星注射剂以及阿米卡星对大肠杆菌感染雏鸭的体内抗菌作用以半数有效量ED50表示：ED50＝1 g-1[Xm-i(∑P-0.5+i(1-Pm-Pn)/4］，其中，Xm为最大剂量对数值，i为组距即高低剂量之比的对数值，Pm为最高存活率，Pn为最低存活率。 1.3.5 最低抑菌浓度(MIC)采用试管二倍稀释法测定。 2 结果 2.1 体外抗菌活性 恩诺沙星和阿米卡星对大肠杆菌O78的MIC分别为0.60 mg/L和0.25 mg/L。 2.2 体内抗菌活性 雏鸭感染大肠杆菌4h后相继发病，首先表现为精神沉郁，厌食，继而采食量下降、食欲废绝，拉清白色稀薄粪便。病程后期严重脱水，双蹼干瘪，双翅下垂，伏地。感染对照组动物72 h内全部死亡，给药组动物最迟到第6天有死亡。病死鸭剖检可见大肠杆菌病的典型病变，主要表现为气囊炎、心包炎、肝周炎。从肝脏、脾脏、心包液等病料可分离到大肠杆菌，回归动物具有致病性。 经计算，恩诺沙星注射剂、恩诺沙星混悬剂和阿米卡星对大肠杆菌在雏鸭的体内抗菌活性以ED50表示分别为1.85 mg/kg、5.01 mg/kg和1.37 mg/kg，相应的95%平均可信限分别为1.46 mg/kg→2.24mg/kg、4.07mg/kg→5.95mg/kg和1.08mg/kg→1.66mg/kg。 3 讨论 3.1 体外抑菌试验显示，以大肠杆菌O78标准菌株进行药敏试验，恩诺沙星的MIC为0.60 mg/L，显示高度敏感，提示可以此菌株作为攻毒的菌种。体外抑菌试验结果是评价抗菌活性的主要指标，也是临床选用抗菌药物的主要依据。但体外药敏试验结果受许多因素的影响，且仅仅是对药物本身的评价，一般不能用于评价药物制剂的治疗作用。 3.2 有关恩诺沙星对大肠杆菌病的疗效已多见诸文献报道，但通常是以1～3个剂量组进行的。本试验采用肌肉注射1MLD大肠杆菌菌液造成疾病模型，以等比稀释的不同药液给药，通过测定相应药物的ED50，可定量测定不同剂型药物的体内抗菌作用。该方法多以实验动物小鼠进行，国内医学文献中有一些报道，但兽药研究中鲜有报道。本试验采用靶动物雏鸭，所获恩诺沙星两种制剂以及阿米卡星注射剂的ED50值，可作为临床用药的重要参考指标，与恩诺沙星的临床推荐剂量(2.5 mg/kg)互为印证。 3.3 恩诺沙星广泛应用于兽医临床防治动物细菌性疾病和霉形体病。目前，常见的恩诺沙星制剂主要有普通注射剂、散剂、溶液剂等。为延长疗效、减少给药次数，尚可制成混悬剂或其他长效制剂。恩诺沙星是疏水性药物，微溶于水，在混悬液内，药物除一小部分溶解于水外，大部分是以晶体形式存在，注射给药后吸收延缓，可显著延长疗效。但也有一些学者认为，混悬剂中药物的吸收延缓，起效时间慢，对某些急性细菌性疾病的治疗不利。因此，常在混悬剂的制备中适当增加速效部分药物。本实验结果显示，对雏鸭试验性大肠杆菌感染，恩诺沙星混悬剂的体内抗菌活性略低于普通注射剂，但考虑到实际应用中混悬剂给药剂量相对较大(推荐剂量为20 mg/kg)，且药效试验和临床实际应用已证实，恩诺沙星长效混悬剂按20 mg/kg体重肌肉注射可完全控制鸭大肠杆菌病，疗效确实。 因此，只要制剂工艺合理、配方适宜，无需特别增加速效部分药物。 3.4 有资料及临床用药结果显示，禽源大肠杆菌对恩诺沙星的耐药性较为普遍，该药无指征的滥用是造成耐药菌株越来越多的最主要原因。但恩诺沙星作为一种治疗用药，在合理的药敏试验基础上，现在和今后相当长一段时期内在兽医临床仍将作为治疗畜禽细菌感染和支原体病的一线药物。因此，有关该药新制剂的研制及其体内外抗菌作用研究，仍具有重要理论和实践意义。 |
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