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聚合酶链式反应(PCR)
聚合酶链式反应(PCR)诊断技术可以直接从病料中检测病原，不需病毒分离，是一种快捷敏感的诊断法。Molitor等最早在1991年报道采用聚合酶链式反应(PCR)方法诊断PPV，鉴于目前临床上常见几种疾病混合感染的情况。KimJ等报道，针对病毒基因组保守序列设计几对引物，应用多重PCR检测公猪精液，可同时诊断猪圆环病毒Ⅰ型和Ⅱ型以及PPV感染，该方法灵敏度高，诊断迅速，可同时检测几种病毒。李文刚、王汉中分别依照VPl、VP2序列设计引物建立了常规PCR和套式PCR检测猪细小病毒，提高了检测的特异性和敏感性，但结构蛋白基因VP1、VP2保守性不如非结构蛋白基因NSl。Soarex根据NSl序列建立nest-PCR方法检测PPV，结果表明该方法敏感性比HA高106倍。赵俊龙建立PRV和PPV复合PCR检测方法，能用于临床上两种疾病的鉴别诊断和混合感染的检测。刘业兵等针对非结构蛋白基因NSl序列建立的PCR方法，具有很强的敏感性。虽然PCR可在体外快速特异地将仅含1个拷贝的靶序列扩增106倍，但PCR扩增在引物设计及实验条件各方面要求都较高，专业性较强，且只能扩增出与引物核苷酸序列一致的部分毒株，另外，由于PPV的广泛存在以及猪体感染病毒后长期带毒的现象，很难通过PCR检测区别自然感染和疫苗株。
核酸探针技术
Krell等1988年率先将核酸探针技术用于PPV的诊断，结果最低可检出0．1pg的DNA。Koromysla报道用DNA探针能检测出实验感染母猪的木乃伊胎儿内脏悬液中的PPV。侯喜林等1997年研制出地高辛标记猪细小病毒核酸探针，运用该探针检测了多株PPV病毒及其他对照病毒，可以检出PPV最小量为40pg的DNA。核酸探针技术具有快速、敏感、特异性强等特点，特别适用于疾病的早期诊断和类症鉴别诊断，是近二十年来应用较多的一项诊断技术。它与32P标记探针具有相同的敏感性，并且克服了生物素标记探针敏感性差、背景深等缺点。核酸探针技术适于实验室进行PPV感染的诊断，但该方法的技术含量高，只能在专业实验室应用，不适合大面积临床诊断和现场应用。
银加强胶体金技术(SEC-GA)
银加强胶体金技术是近年来发展起来的一种新技术，是对三大标记(荧光素、放射性同位素和酶)的一个补充。黄瑜等首次建立了检测PPV抗原的银加胶体金染色法(SECGA)，并确定该方法操作流程的最佳实验条件。银加强胶体金技术(SECGA)与三大标记相比，除了其本身具有的特定大小和形状、高电子密度、颜色反应等特点外，还有以下优点：①试剂和样本用量少，每个样本只需1μL~2μL；②不需荧光显微镜、酶标仪等贵重仪器，可用光镜或肉眼观察结果，更适于临床应用；③避免了同位素的放射性污染和酶底物的致癌性作用，对人体无害；④试剂稳定，试验结果可长期保存；⑤由于省去了底物反应这一步，故与Dot—ELISA相比反应时间更短，加快了检测速度；⑥在金标过程中无共价键形成，是一定离子浓度下的物理吸附，因此几乎所有的大分子物质都能被胶体金标记，且标记后的大分子物质生物活性不发生改变；⑦胶体金再结合银染色，检测的敏感性可大大提高。当然，此技术也存在不足之处，如点样不准确会影响结果的准确性，试验所用的试剂需用去离子水配置及试验结果受主观因素影响等。
结语
由于猪细小病毒病的广泛传播给世界养猪业带来了严重危害，本病已引起各国的高度重视，相关研究也在不断展开。本病的诊断方法与技术的研究与探索也取得了显著的成绩。综上所述，用于PPV感染的诊断方法很多，各种方法具有不同的优缺点，相对而言，目前应用较多的是HA和HI试验，这两种方法基本能满足常规的病原检测和血清流行病学调查等需要。要得到病原学的确诊，则最好利用病毒分离鉴定方法，这时免疫荧光技术经常成为首选。随着对PPV基因组结构和分子生物学的进一步认识，对本病研究的进一步深入，以及国内外学者不断致力于PPV新型疫苗的研究及更为先进的诊断方法的开发。相信一些特异性强、灵敏性高、简便易行的新型检测(诊断)方法终将问世并得以推广应用。
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