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猪细小病毒病以其危害大而备受业界的关注。目前，国内外已建立许多检测猪细小病毒的方法，主要有血凝和血凝抑制试验、荧光抗体技术、放射免疫测定、免疫微球试验、酶联免疫吸附试验、银加强胶体金技术、单克隆抗体技术、核酸探针检测技术以及多聚酶链式反应等。本文就该病检测方法的研究进展做一综述。
猪细小病毒(PPV)是以引起胚胎和胎儿感染及死亡而母体本身不显症状的一种猪繁殖障碍性传染病。临床主要表现为胎儿感染死亡，产出死胎、畸形胎、木乃伊胎及不孕等症状，还可致皮炎和腹泻。PPV与2型圆环病毒(Porcinecircovirustype2，PCV2)协同感染是导致断奶子猪多系统衰竭综合征（PMWS)的主要原因之一。近年来，随着我国规模化养猪业的发展和品种的引进，PPV感染呈扩大上升的趋势，给养猪业带来了巨大的经济损失。经初步调查，我国猪群中PPV血清阳性率高达92％左右。因此，为了保障我国养猪业的健康发展，加强对本病的检测具有十分重大的实际意义。
一般情况下，如果一个猪场在同一时间内仅妊娠母猪发生流产、死胎、木乃伊胎，其他猪无明显症状，同时有证据证明是一种传染病时，应该怀疑是PPV感染，并做进一步检测。
病毒学检查
病毒的分离与鉴定
1.病料的采集和分离
70日龄以内流产胎儿、死胎、木乃伊胎及弱子的脑、肾、睾丸、肠系膜淋巴结或母猪的胎盘和阴道分泌物均可作为分离病毒的材料，以肠系膜淋巴结和肝脏分离率最高。病料加双抗处理，研磨至乳状，4℃冰箱过夜，每分钟3000转离心10分钟，取上清液-20℃保存备用。准备猪肾原代或继代细胞，待细胞生长铺满至细胞瓶的1／3时，倾倒瓶内营养液，加入已处理好的病料上清1毫升，37℃吸附1小时，期间每隔15分钟摇一次，加入无血清的维持液，继续培养3天～6天，每天观察，直至细胞出现病变。未出现病变者，盲传3代，仍没有病变弃之。若有PPV存在，培养16小时~36小时的细胞核内可观察到包涵体，3天~6天出现特征性细胞病变。病毒分离成功的关键在于是否同步接种，这是因为病毒主要在有丝分裂的S期细胞内复制，即同步接种后16小时～48小时。也有人强调在种植细胞的4小时内必须将含病毒的样品加入到培养瓶中，否则病毒增殖不理想。
2.病毒鉴定
①电镜观察 将出现明显病变的细胞经胰酶消化后，经离心、洗涤处理，包埋成小块用锇酸固定，经脱水、浸透及醋酸铀和柠檬酸铅正性染色后电镜检查。在细胞核内可见大量的病毒粒子，呈圆形，无囊膜，大小约20nm。
②血凝及血凝抑制试验 血凝试验：将出现病变的细胞培养物反复冻融3次，每分钟2000转离心10分钟，除去细胞碎片，在96微孔板上按1∶22、1∶23、…1∶2n倍比稀释，每孔加入50μL，再加入50μL的0．5％豚鼠红细胞混匀，4℃作用1小时~2小时判定结果，以50％的红细胞能发生凝集判为终点，样品出现凝集终点的最高稀释度定为HA滴度。血凝抑制试验：将血清在96微孔板上按1∶22、1∶23、…1∶2n的比例倍比稀释，每孔加入50μL，再加入50μL4单位的抗原混匀作用，30分钟后加入50μL的0．5％豚鼠红细胞，4℃作用1小时～2小时判定结果，以能完全抑制红细胞凝集的血清最高稀释度定为HI效价。该试验较为简单，易操作，是基层兽医检测PPV较为经典的方法。
③间接免疫荧光法 病毒分离不适合作常规的诊断方法，因为PPV的感染性在胎儿死后会缓慢地丧失，而且分离病毒耗时很长，甚至有时培养的细胞本来就已经污染。病毒分离和鉴定是PPV感染最为确切的诊断方法，但是费时费力，并且需要一定的技术条件和设备。另外，其感染力会随着胎儿死亡时间而降低，从而限制了临床应用。
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