猪繁殖与呼吸综合征的诊断研究进展与防控策略

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的，以猪群的呼吸道症状、母猪繁殖障碍、以及死亡率增加为主要临床症状特点的传染性疾病。PRRSV属于动脉炎病毒科，动脉炎病毒属，是一种有囊膜的单股正链RNA病毒。在免疫和自然选择压力下，病毒基因组的突变与宿主内准种多样性的演变推动病毒迅速进化，使优势准种在群体中逐步增加，形成新的毒株表征。本文通过对当前国内外PRRS诊断方法及防控经验进行综述，希望对养殖生产管理人员在PRRS防控方面有新启发。

1 PRRS的疾病诊断

PRRS作为一种普遍存在的基础性疾病，猪场一旦出现母猪繁殖障碍或各日龄仔猪呼吸道疾病等现象，通过临床诊断、流行病学调查、生产数据统计、实验室监测等进行综合研判，提前预警疾病的发生。

1.1 临床症状及流行病学统计

猪群之间PRRS的临床症状受病毒毒株、猪群抗体保护水平、脂多糖暴露程度以及其他因素的影响。早期症状以厌食和精神沉郁为主，持续14 d以上，发病比例占猪群的5%～75%，不同生产阶段的猪只均可感染发病，并呈现“滚动性食欲不振”现象。随着病程的发展，临床症状多为发热、呼吸困难、末端表皮出现短暂的充血或发绀；急性PRRSV感染的母猪流产率可达10%～50%，死亡率约10%，并伴有肺部水肿或肾炎等症状；繁殖障碍的表现主要是母猪妊娠21～109 d的流产率在3%以上，除明显的流产外，还会出现流产后不规则发情或不孕，持续时间为1～4个月。母猪在怀孕后期出现病毒血症，其所产活仔断奶前死亡率升高；5%～80%的母猪所产仔猪中有健仔、弱仔、自溶死胎和木乃伊胎儿等多种组合，其中死胎占比7%～35%。此后，耐过母猪发情延迟、空怀率升高。染病公猪的主要症状是厌食、呼吸道症状以及性欲低下和精液质量降低。

新生弱仔感染PRRSV表现为消瘦、呼吸急促和眼结膜水肿等，个别病例会出现神经症状、脐部出血及细菌性多发性关节炎和脑膜炎，断奶前死亡率高于正常。断奶仔猪感染PRRSV主要表现为精神差、发烧、毛发粗乱、呼吸道症状明显但不咳嗽等，死亡率高达12%～20%。此时如果饲养环境比较差，仔猪易继发感染沙门氏菌、链球菌、副猪嗜血杆菌等细菌性疾病。

1.2 病理剖检

肺脏和淋巴结是PRRSV复制的主要场所，感染猪只均出现间质性肺炎和淋巴结肿大等症状。其中肺部病变主要呈现质地坚硬、灰黑色带有斑点并且湿润；严重病变为弥散性分布，软组织上有斑点或呈现红褐色，橡胶状且非常湿润。感染PRRSV猪只淋巴结肿大2～10倍，早期淋巴有水肿，色泽棕褐、质地稍硬。随着病情的发展，淋巴结硬度增加，颜色变浅或白色。肾、肝和胸膜脏层等表层会出现淤点或瘀斑等症状。妊娠后期的仔猪受病毒侵袭，出生后呈现典型特征性病变脐带出血扩增，比正常大3倍。

2 猪长途运输前

猪只感染PRRSV后相关病变比较复杂，而实际生产中又有很多病例在多种病毒和细菌的混合感染下使临床现象更加复杂，难以确诊。因此，最终确切的诊断需要实验室检测病毒、病毒产物或抗体的存在。能够用于实验室诊断PRRSV的技术主要有分子诊断和血清学诊断，每种诊断技术均有优缺点，根据试验目的不同选择适当的技术方法。

随着实时荧光PCR技术的普及，大型养殖企业已建立起PCR实验室，使得多种疾病分子检测工作可以在生产一线完成。荧光定量RT-PCR技术因其灵敏度高、特异性强，被广泛用于PRRS感染诊断以及排毒期监测。病毒基因容易发生突变，尤其是类似PRRSV的RNA病毒突变频率较高，在荧光定量PCR的检测中若引物结合部位序列发生突变，会导致引物结合效率的降低甚至扩增失败。为了能够减少漏检概率，需要不断收集最新流行毒株，并在设计引物时充分考虑多个高度保守区域，开发出多重实时荧光PCR反应体系。

Y.F Chang等开发了一种直观、灵敏度高和特异性强的诊断技术——CRISPR-Cas13a，该检测技术是基于CRISPR Cas13a的新型核酸检测方法。CRISPR Cas13a检测PRRSV有很高的特异性和灵敏度，检出极限为172 copies/μL。不仅可用于实验室的荧光检测分析，还可以与免疫层析相结合进行可视化现场检测。该方法对设备要求较低，适用于资源贫乏的地区。

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