浅谈口蹄疫灭活疫苗有效成分及稳定性问题

图 2.O型口蹄疫完整病毒粒子能刺激机体产生早期IgM 抗体

2.什么是146S? 评价标准是什么？

146S是指口蹄疫病毒在繁殖子代病毒过程中，由病毒衣壳和基因组共同组成的完整粒子，不是所有的抗原都能产生有效抗体，能刺激机体产生有效抗体的抗原才称为有效抗原。口蹄疫完整病毒粒子在蔗糖密度梯度中的沉降系数为146S，所以我们就用146S来代表口蹄疫疫苗的有效抗原。

目前146S评价方法有蔗糖密度梯度离心法、 紫外分光光度计定量法、液相色谱仪定量法、ELISA 检测法等四种检测方法，但蔗糖密度梯度离心法是OIE推荐的金标准检测方法，大部分疫苗生产企业用此方法进行定量添加抗原，因为完整的 146S 抗原上有口蹄疫病毒的所有中和位点，能有效刺激动物机体产生抗体，因此完整的146S粒子的浓度多少，可作为一项评价口蹄疫疫苗质量的标准。

3.口蹄疫疫苗抗原稳定性与免疫原性的关系

稳定的抗原和安全、有效的佐剂是疫苗研究的重点和难点。口蹄疫灭活疫苗的最大缺陷在于其稳定性很差，在低温长期储存、加热和微酸性环境中，病毒颗粒极其容易裂解，裂解产物也被称为12S，12S是一个由VP1、VP2、VP3组成的五聚体。因为五聚体之间存在大量的组氨酸残基，在酸性环境下组氨酸会迅速发生质子化，释放正电荷，通过静电排斥作用引发粒子裂解，这是口蹄疫不稳定的原因。由于146S粒子在酸性环境下分解成12S 粒子，而12S表面的免疫反应位点被隐藏或发生形变的缘故，使12S不具备任何免疫原性，无法激发产生抗体，降低口蹄疫疫苗的免疫效力。口蹄疫病毒会在高温状态下，使组合状态的 12S 粒子转化为分解状态，因此口蹄疫病毒不宜长期暴露在高温状态下。口蹄疫疫苗效力与口蹄疫灭活疫苗中的 146S 粒子数量有关，若是能够确保 146S 粒子稳定不被分解，那么口蹄疫疫苗的效力就能到有效的保护，这也是口蹄疫灭活疫苗必须在2~8℃保存的原因。口蹄疫抗原稳定性差给口蹄疫疫苗的生产、储存和应用带来了很多困难，使用过程中必须全程冷链运输以保护口蹄疫的免疫原性。

从图3数据可知，金宇口蹄疫 A 型、 O型灭活疫苗在2~8℃分别放置 12个月，每月采用蔗糖密度梯度离心定量法检测146S含量，结果发现，146S抗原含量基本没有变化,说明疫苗有效抗原保存比较好，完整病毒粒子保存完整，对疫苗效力有极大的帮助。

图3.口蹄疫灭活疫苗2~8℃放置12个月的含量的变化

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