H7N9亚型禽流感疫苗研究进展

2018年潘俊慧等针对H7N9亚型流感病毒，构建了表达A/chicken/Guangxi/SD098/2017毒株C GX/SD098) HA蛋白的重组质粒pCA-SD098同时通过背靠背的优化方法，利用双表达框策略构建了共表达H7N9和HSN1亚型流感病毒HA蛋白的双价DNA疫苗质粒pCA-GZ4-SD098，并对构建好的DNA质粒进行免疫效力评价，发现pCA-SD098能够100%抵御H7N9亚型流感病毒的致死性攻击，双价DNA质粒pCA-GZ4-SD098、质粒pCA-SD098和pCA-GZ4混合免疫，能同时对H7N9和HSN1亚型流感病毒的致死性攻击提供100%的保护，因而有效降低了感染后的病毒载量。

目前已证明，DNA疫苗具有安全性高、耐受性好、免疫原性好等优点，可获得较高的HI和中和抗体效价，足以应对流感毒株攻击，可对动物起到稳固的保护作用。

2. 2 RNA疫苗

RNA疫苗是将含有编码抗原蛋白的RNA导入人或动物体内直接进行翻译，形成相应的抗原蛋白，从而诱导机体产生特异性免疫应答，以达到预防免疫作用。Kapil等将H7N9亚型流感病毒(A/安徽/1/2013) HA蛋白mRNA进行修饰后制备成mRNA疫苗，结果发现该疫苗在小鼠、雪貂和非人灵长类动物中产生了强烈的免疫应答，诱导产生了较高的HI抗体，单剂量免疫即可保护小鼠免受致命性攻击，并可降低雪貂的肺部病毒滴度。该试验证实了mRNA疫苗具有良好的免疫原性和不受种属差异限制的优点。与传统疫苗相比，mRNA疫苗具有很多优势:其一，mRNA没有潜在的感染风险，并且可在体内降解，由此确保了疫苗的安全性；其二，mRNA翻译效率高，可诱导高效的免疫应答反应，并可重复接种；其三，mRNA疫苗体外转化率高，可提升mRNA疫苗生产速率，因而更具市场竞争力。

3 亚单位疫苗

亚单位疫苗是将流感病毒的基因，如HANNA等蛋白基因，克隆到基因表达载体上，利用微生物、哺乳动物等表达系统来产生具有免疫原性的蛋白，然后通过一系列纯化得到高纯度蛋白，最后加入佐剂制成的。这种疫苗具有很好的安全性，但是免疫原性较低，需要加入佐剂才能刺激机体产生高水平抗体。很多研究已经证明了亚单位疫苗可以产生高滴度的抗体，抵御流感病毒的致死性攻击。它的局限性也很明显，重组亚单位疫苗需要找到一个好的表达系统，而表达出具有抗原性的高产蛋白更为关键。因此，高质量的疫苗需要成熟的技术支持才能得以应用推广。

Hasan等采用电子逆向疫苗策略，设计了一种针对H7N9亚型流感病毒的独特嵌合亚单位疫苗。首先筛选出最具抗原性的蛋白质组表位，然后将一个高免疫原性表位与合适的佐剂和连接剂相结合，最后利用反向遗传技术，开发出一种独特的针对H7N9亚型流感病毒的嵌合亚单位疫苗。经验证，此疫苗理化性质稳定，能够诱导机体产生细胞免疫应答。

4  VLP疫苗

VLP是含有某种病毒一个或多个结构蛋白的颗粒，由表达病毒结构蛋白的细胞自行组装形成。VLP模拟了天然病毒的构象表位，具有免疫原性，可诱导产生免疫应答，具有良好的安全性，但其不含病毒核酸因而不能自主复制。目前VLP常用的表达系统有杆状病毒、昆虫细胞、细菌、植物和衍生系统。2019年Breanna等研制了基于流感病毒HA蛋白的植物来源VLP疫苗，发现小鼠肌内注射后可引发体液和细胞免疫反应，保护老龄小鼠免受致命攻击，并且此疫苗采用喷鼻方式免疫，即可获得较好的免疫效果。2020年李如梦等选取了一株H7N9亚型流感病毒A/Chicken/Guangdong/GD15/2016 CDG50)作为目的基因供体，构建出基于重组杆状病毒昆虫细胞悬浮培养系统的H7N9VLP新型疫苗。免疫效力试验显示:该VLP疫苗能够诱导产生较强的免疫反应，针对H7N9亚型流感病毒攻击可提供完全的临床保护且抑制排毒.VLP疫苗具有生产周期短、制备成本低、安全性高等特点，但其不能100%抑制排毒，使其目前未能应用于临床，是一种非常具有开发潜力的流感疫苗。

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