非洲猪瘟病毒流行株与基因缺失株鉴别检测规范

6.3  结果分析

Ct值由荧光PCR仪的软件自动确定。

6.3.1  试验成立条件

阳性对照P72、CD2v、MGF 360-505R基因的Ct值均＜35且出现特异性扩增曲线，阴性对照P72、CD2v、MGF 360-505R基因无Ct值或阴性对照P72、CD2v、MGF 360-505R基因Ct值≥40且无特异性扩增曲线，判为试验有效。试验无效时应重新进行试验。

6.3.2  P72、CD2v、MGF 360-505R基因检测结果判定

6.3.2.1  P72基因检测结果判定（FAM通道）

被检样品Ct值≤38且出现特异性扩增曲线，判为ASFV P72基因检测阳性；无Ct值或Ct值≥40，判为ASFV P72基因检测阴性；38＜Ct值＜40且出现特异性扩增曲线，判为疑似。对疑似样品，再进行1次复检，做3个重复；至少2个重复Ct值＜40且出现特异性扩增曲线即判为ASFV P72基因检测阳性，否则判为ASFV P72基因检测阴性。

6.3.2.2  CD2v基因检测结果判定（VIC通道）

被检样品Ct值≤38且出现特异性扩增曲线，判为ASFV CD2v基因检测阳性；无Ct值或Ct值≥40，判为ASFV CD2v基因检测阴性；38＜Ct值＜40且出现特异性扩增曲线，判为疑似。对疑似样品，再进行1次复检，做3个重复；至少2个重复Ct值＜40且出现特异性扩增曲线即判为ASFV CD2v基因检测阳性，否则判为ASFV CD2v基因检测阴性。

6.3.2.3  MGF 360-505R基因检测结果判定（Cy5通道）

被检样品Ct值≤38且出现特异性扩增曲线，判为ASFV MGF 360-505R基因检测阳性；无Ct值或Ct值≥40，判为ASFV MGF 360-505R基因检测阴性；当38＜Ct值＜40且出现特异性扩增曲线，判为疑似。对疑似样品，再进行1次复检，做3个重复；至少2个重复Ct值＜40且出现特异性扩增曲线即判为ASFV MGF 360-505R基因检测阳性，否则判为ASFV MGF 360-505R基因检测阴性。

6.3.3  综合判定

结合P72、CD2v、MGF 360-505R等3个基因的检测结果进行综合判定。具体判定标准见附表。

附表   综合判定标准

注：“+”代表检测阳性；“-”代表检测阴性

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