猪圆环疫苗质量现场评估之初见

猪圆环病毒2型（PCV2）是断奶仔猪多系统衰竭综合症（PMWS）的主要病原体，能引起猪的一系列相关的临床病症，这些疾病统称为圆环病毒相关疾病（PCVAD），给世界养猪业造成了巨大的经济损失。自从猪圆环病毒疫苗产品化以来，疫苗免疫已成为控制PCV2的重要策略。

猪圆环疫苗生产厂家多、疫苗类型多，五花八门，细数下来有20-30种。更有甚者，同一个厂家也有多种。简言之，圆环疫苗分为三大类：全病毒疫苗、嵌合疫苗、基因工程亚单位疫苗（真核表达和原核表达两种）。

我们常说圆环病是经济病，因为它直接影响生产效率。如何选择优秀的疫苗成为各级养殖场关心的问题。根据本实验室的经验，优秀的疫苗不外乎如下几点：

1、有效抗原含量足够：有效抗原至少达到一定的浓度水平，才有可能产生足够的保护。

2、免疫后抗体效价足够高：尤其是中和抗体水平。

3、排毒的猪数量减少或排毒量减少。

当然，严格说来优秀的疫苗还涉及很多其他因素：比如疫苗的类型；与流行毒株的关系；免疫佐剂的使用；病毒或蛋白的纯度；如乳化的话，乳化颗粒的大小、均一性，乳滴的大小等。

一、有效抗原的含量

CAP蛋白是圆环病毒重要的结构蛋白，可以刺激机体产生中和抗体，基因工程亚单位疫苗中的有效抗原即为CAP蛋白。CAP蛋白的含量、空间构象、蛋白表达后的修饰等都会影响免疫的效果。一般而言，有利于维持CAP蛋白空间构象的表达、纯化方式对疫苗的效果是有帮助的。

1、猪圆环II型病毒抗原胶体金测试卡检测原理

标驰泽惠实验室开发了针对CAP蛋白的猪圆环II型病毒抗原胶体金测试卡（G19），该测试卡采用了4株特异性单克隆抗体配对而成。检测时，样品中的CAP蛋白与胶体金标记的单克隆抗体结合，沿着硝酸纤维素膜泳动，到达T线（检测线）时与固定在膜上的另外2株单克隆抗体结合、沉淀，形成红色条带；未结合的胶体金标记物继续泳动，在C线（质控线）处形成红色条带。如C线出现意味着实验有效，如C线不出现，说明实验不成立，应该重新实验。下图为该产品实物照片，产品货号为G19。

2、胶体金测试卡只检测空间结构完整的“有效抗原”

该产品只用于检测圆环疫苗中的有效抗原，如果采用物理、化学的方法破坏CAP蛋白的空间结构，（此时，免疫效果恐怕会大受影响）再用该产品检测，基本无法测出。

上图：某知名全病毒疫苗热裂解后检测抗原水平。稀释5倍后检测，热裂解（60度）与室温（RT）比，抗原剩余22%。

上图：某知名真核亚单位疫苗热裂解后检测抗原水平。稀释200倍后检测，热裂解（60度）与室温（RT）比，抗原剩余不足3%。

除采用热裂解外，本实验室还采用其它方法比如超声、酸、碱、反复冻融等手段处理抗原使其空间结构破坏，检测结果类似，在此不再赘述。

总之，该胶体金检测技术能够在一定程度上区分空间结构正确的和不正确的抗原，也就是说，只检测对的抗原。

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