国内外口蹄疫疫苗质量监控技术的研究进展

目前，国际上通用的疫苗效力检测试验就是本动物攻毒试验，欧洲大多数国家采用的百分之五十保护剂量（PD50）测定法，这种方法对试验动物的要求必须是来自无口蹄疫地区并从未进行过 FMD 免疫，血清无任何型 FMD 病毒中和抗体，大于六个月龄的牛。这使得疫苗生产厂家和兽药监管机构检测疫苗时，实验动物的获取就有着相当大的困难，更别提要动用大量的人力和财力了，同时还有散毒的危险。而南美国家多采用直接动物攻毒测定疫苗保护百分率（PDP）法：选择 18 ～ 24 月龄健康无口蹄疫感染牛 16 头，分别免疫 1头份疫苗，免疫后 28 天以 104 牛半数感染量（ID50）病毒舌面攻毒感染 16头免疫牛和 2 头未免疫对照牛，观察 7天，至少 12/16 免疫牛获得攻毒保护，则该疫苗合格。同时 OIE 也同意一些选择性的替代试验可以被使用。因而世界各国的研究人员都在努力研究新的可以替代本动物攻毒试验的方法。国外一些学者报道使用豚鼠来做为口蹄疫病毒人工感染的模型动物，不但可以通过抗体检测，而且也具有相应的临床症状和典型的病理变化，可以被用做口蹄疫疫苗的效力检验，此后各国研究人员都对此做了深入的研究，但是到目前为止，仍未有一个像本动物攻毒试验那样，有着确定统一的标准。有大量发表的数据证明，高的体液抗体水平和保护水平相关。大量的技术被用来检测体液中的抗体水平并分析抗体滴度与保护力在统计学意义上的关系。1993 年 O.H.Periolo 和 C.Seki等 人 使 用 由 Hamblinef al 改 进 的液相阻断 ELISA（lpELISA）方法在阿根廷大规模应用评价已接种油佐剂口蹄疫疫苗牛的保护性免疫，他们以商品化四价油佐剂疫苗免疫的1634 头动物以及 746 头未免疫的阴性动物中，应用液相封闭夹心ELISA 检测四种口蹄疫病毒株的特异性血清活力水平，结果显示血清LpELISA 效价水平与动物的保护百分比直接相关；之后阿根廷的 B.Robiolo 等人使用 245 批商品口蹄疫苗来对 3920 头牛进行免疫，在免疫后 60 天（d.p.v.）采取这些动物的血液，分离血清，使用他们组建的液相阻断 ELISA 方法（lpELISA）测定血清效价，并且在免疫后 90 天（d.p.v.）用活口蹄疫病毒进行攻毒，确定疫苗保护力。然后分析发现使用他们的 lpELISA 方法评价疫苗的效力（即测定最低期望保护率，LEP）与本动物实验的结果相比，有高达95%的可信度。lpELISA 具有高度的特异性，他们通过使用一个相关系数（Ro）来更进一步的提高这种评估方法的可靠性，依据所获得的大量数据并进行了深入的分析后，他们建议对使用商品口蹄疫疫苗免疫后 60 天（d.p.v.）的动物测定其 LEP 值，如果 LEP 达到 82%（或 Ro ≥ 4）时，判定该批疫苗效力检验合格；如果 LEP低于 50%（或 Ro ＜ 0.50）时，判定该批疫苗效力检验不合格；而鉴于两者之间的，则应使用其他已选的攻毒毒株进行复检，测定其最低的 Ro，达到标准后，方可判定合格。1987 年 Tsuda 等首先证实了康复牛血清中的抗体几乎都为 l46S 抗体，利用了这一特性进行单向免疫扩散试验检测疫苗抗原中的 146S，并认为可以与本动物保护性试验比较，确定相关性，以一定大小的扩散环作为标准，定量 146S 抗原，达到替代本动物保护性试验的效果。用现代新技术计算机软件进行色谱分析估测疫苗中 146S 抗原量是Shirai 等 1990 年提出的。色谱分析所得数据与紫外分析后计算 146S 峰区面积和比重，所得数据有显著差异，其所测的 8 批疫苗计算机色谱分析所得数据分别为 2.674-0.07g/mIJ,3.00±0.05Pg/ml、2.84±0.23g/ml,4.30±0.27g/ml,3.31±0.08g/ml,4.07±0.371g/ml，3.56±0.14Pg/ml、3.59±0.07g/ml，其疫苗在动物体的保护率 分 别 是 80 ％、95%、80%、100%、80%、95%、80% 和 100%。因此 Shirai认为可用这种方法来代替动物保护性试验，从多方面来说都是有利的，不但方便且又安全，在泰国口蹄疫疫苗生产中心检测应用认为是可行的。口蹄疫疫苗中 146S 抗原量达到一定程度才能说明这种疫苗质量良好，目前泰国口蹄疫疫苗生产中心所生产的 O 型灭活疫苗，其 146S 含量在 2.0Pg/ml以上，认为是合格的。

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