猪伪狂犬病病毒及疫苗的研究进展(一)

5、伪狂犬病疫苗的发展现状

5.1 弱毒疫苗

自然弱毒疫苗是通过非猪源细胞或鸡胚的反复传代或在某些诱变剂的存在下，高于通常的培养温度在细胞培养物上反复继代获得，其基因组的内部存在着多处点突变以自然及基因缺失，属于一种天然的基因缺失疫苗。在20世纪60年代后，许多国家用不同的方法培育了不少伪狂犬病弱毒疫苗株，如匈牙利的Bartha株、K61株、罗马尼亚的布加勒斯特株、TK200和BUK株、北爱尔兰的NFA-4株、法国的Alfolt-26株、保加利亚的MK25株、前苏联的VAGK-2株等。而目前应用较为广泛的主要有匈牙利的Bartha株、罗马尼亚的布加勒斯特株、BUK株等。

Bartha株是1961年匈牙利学者Bartha用猪源伪狂犬病强毒通过猪肾、鸡胚反复传代致弱的一个疫苗株。采用分子生物学方法对该疫苗株进行分析发现，疫苗株的基因组中存在多处突变。US区的整个gE和nK基因及部分91和28K片段缺失，UL区的gC基因信号序列存在点突变。由于该疫苗株的主要毒力基因TK没有缺失，因此与其它毒株相比，其存在一定的毒力。

布加勒斯特株(Bueharest)是罗马尼亚的布加勒斯特株兽医所将伪狂犬病强毒通过鸡胚尿囊膜培养继代至200代后，降低了其毒力，再用鸡胚培养后而制成的疫苗株。该疫苗株制成的冻干苗仅适用于9日龄以上的仔猪和妊娠2月龄的母猪，对兔、豚鼠和小鼠尚有较强的毒力。

BUK株是将1个Bucharest株通过鸡胚和鸡胚成纤维细胞继代800代以上获得的一个疫苗株。该疫苗株的毒力相比强毒株已大大减弱，对妊娠母猪和仔猪都有一定的免疫作用。

总的来说，虽然自然弱毒疫苗价格低廉，在伪狂犬病防制方面有着较强的免疫效果，但其主要毒力基因TK没有缺失，故其毒力返强的可能性很大，有可能导致疫病的流行，而且未经充分致弱或过度致弱的疫苗株不仅不能诱导满意的免疫保护反应，反而有可能引起疫病及免疫抑制。弱毒疫苗还可导致潜伏感染，存在散毒的可能，在部分接种的猪血清中虽然存在中和抗体，但其排毒期却可持续数年。因此许多国家已禁止使用弱毒疫苗，而以TK基因缺失的基因缺失疫苗取代。

5.2 亚单位疫苗研究进展

亚单位疫苗是将PRV保护性抗原基因在原核或真核系统中表达所获得的产物制成的疫苗。它具有许多优点:（1）安全性好，疫苗中不含任何病原微生物，接种动物后不会发生急性、持续或潜伏感染，可用于不宜使用活疫苗的情况，如妊娠动物。（2）可以减少或消除常规活疫苗或灭活疫苗难以避免的热原、变应原、免疫抑制原或其他有害的反应原。（3）疫苗稳定性好，便于保存和运输。（4）产生的免疫应答可以与野毒感染所产生的应答相区分，有利于疫病的控制和消灭。（5）可以大量生产。

目前，在己发现的伪狂犬病病毒的11种糖蛋白中，gB、gC、gD均能诱导机体产生中和抗体。在没有补体的参与下， gB、gC、gD的单克隆抗体均能中和PRV。小鼠和猪注射gB、gC、gD的单克隆抗体后均能抵抗PRV强毒的攻击。因此， gB、gC、gD是研制PRV亚单位疫苗的首选蛋白。Marchioli等将PRV保护性抗原基因gD克隆到PSVZdhfr载体的人巨细胞病毒(hCMV)启动子的下游，然后转入中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中，经氨喋呤筛选出1株表达糖蛋白gD的CHOgD-17细胞株，经大量培养后用表达产物配以佐剂，鼻内接种免疫猪，能诱导猪产生中和抗体并保护猪抵抗PRV强毒的攻击。杆状病毒表达的PRV糖蛋白gC能诱导小鼠产生中和抗体。

Tulman等将提取的PRV囊膜蛋白gC制成免疫源复合物即亚单位疫苗。用亚单位疫苗免疫小鼠和猪，均能够诱导抗体应答和淋巴细胞增殖反应。用此亚单位疫苗免疫小鼠和猪，均能够诱导抗体应答和淋巴细胞增殖反应。用此亚单位疫苗免疫两次，能够保护小鼠免受致死量的PRV强毒的攻击。

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