中国造猪瘟疫苗世界领先，克服了牛病毒性腹泻病毒污染！

      牛病毒性腹泻病毒（BVDV）与猪瘟同属黄病毒科瘟病毒属，根据猪体免疫攻毒试验、琼脂扩散试验、中和试验和免疫荧光试验，已经充分证明牛病毒性腹泻病毒和猪瘟病毒之间存在免疫学关系，这两种病毒可能含有共同的可溶性抗原。

      为什么猪瘟疫苗中牛病毒性腹泻病毒难控制？

      猪瘟疫苗的生产工艺，经过多年的长足发展，已经从早期的脾淋苗、组织苗进步到现在的细胞苗、传代细胞苗。细胞苗相对于脾淋苗来说，节省了兔子的使用量，降低了生产成本、扩大了生产效率，同时也提高了抗原含量、提高了稳定性。业内专家普遍认为细胞苗技术相对于旧的脾淋苗是一项技术进步。

      但细胞苗也仍然存在“弱点”，就是——需要使用牛睾丸细胞和牛血清进行培养，这其中就很难避免BVDV的污染。

      1、BVDV污染疫苗影响猪瘟抗体产生

      所谓BVDV，是牛病毒性腹泻病毒Bovine viral diarrhea virus的缩写，其除了引起牛发生黏膜性腹泻外，还可感染包括猪在内的多种动物。BVDV与猪瘟同属黄病毒科瘟病毒属，根据猪体免疫攻毒试验、琼脂扩散试验、中和试验和免疫荧光试验，已经充分证明BVDV和猪瘟病毒之间存在免疫学关系，这两种病毒可能含有共同的可溶性抗原。一般情况下，生猪感染BVDV不表现牛病毒性腹泻的临床症状而呈现亚临床感染，其症状和病理变化类似温和型猪瘟。

      而BVDV之所以是猪瘟疫苗的老问题，是因为目前来说，猪瘟疫苗的生产上通常是使用牛血清去培养细胞及病毒的，而BVDV在牛血清中又普遍存在。根据文献记载和专家的介绍，我国牛感染BVDV几乎达到100%，很少检出阴性牛群。猪瘟细胞苗在生产过程中要用牛血清、胰酶、牛睾丸等材料，这些材料一旦细胞被污染，一来会影响猪瘟病毒的增殖，导致猪瘟病毒本身病毒含量毒价上不去；二来用这些被污染的猪瘟细胞苗给猪免疫接种，BVDV不仅会干扰猪瘟疫苗抗体的产生，造成免疫失败；更严重的是，猪使用污染的疫苗后可感染BVDV， BVDV还可引起母猪繁殖障碍，病毒通过胎盘传染给仔猪，甚至引起仔猪的发病，其临床症状和病理变化与猪瘟十分相似。

      此外，不仅是BVDV病毒抗原，有研究显示即使用含有BVDV抗体的牛血清也会干扰猪瘟病毒的体外培养，出现类似于猪瘟的临床症状和病理变化。

      2、通过检测控制是唯一避免BVDV污染的方法

      实际上，针对兽用生物制品的外源病毒污染，在2010版的《中国兽药典》和现行的《中国兽药典》（2015版）中，均明确写明兽用生物制品活疫苗产品中，BVDV外源病毒是作为必检的项目。中国兽医药品监察所猪瘟参考实验室研究员王琴表示，由于BVDV不能通过任何方法从疫苗中剔除，因此只能通过对原料的控制来避免其进入猪瘟疫苗之中。所以制作猪瘟疫苗用到牛血清，必须是BVDV双阴性的牛血清。而BVDV双阴性的血清等材料只能通过严格的检测来挑选，一旦检出BVDV病原，则必须弃用。在成品检测中如果检出BVDV，也必须要报废。

      在《中国兽药典》中，针对BVDV外源病毒的检验主要是通过将待检疫苗制品接种BVDV敏感的细胞，收获细胞培养物传代一定代次后将细胞培养物再次接种敏感细胞通过荧光染色的方法进行检验。该方法检验周期比较长，且检验用细胞培养仍然要用到血清，对检验细胞使用的血清要求比较高，不太适用于样品的快速检测。那么对于兽用活疫苗，尤其是猪瘟活疫苗产品，有没有一种方法能够快速、准确的做到BVDV的检测，用于指导疫苗生产过程中的原辅料、半成品抗原乃至最后的成品抗原中BVDV外源病毒的检测呢？

      3、区分BVDV与猪瘟的检测方法建立是BVDV控制难点

      国内外科研工作者相继建立了许多检测、诊断BVDV的方法，与RT-PCR为代表的分子生物学检测技术相比，病毒分离鉴定、荧光免疫以及血清中和试验等方法非常耗时，不利于样品的快速诊断。

同时，已分离鉴定的BVDV可分为3个基因型，与同属的CSFV有抗原交叉反应，用ELISA方法也较难于做到有效区分及检测。而RT-PCR、尤其是荧光定量RT-PCR方法既有快速、特异及敏感等诸多优点，通过引物的设计、探针类型的选择及使用，可有效做到BVDV的快速检测及与CSFV的鉴别检测，现已成为BVDV快速检测的首选方法。

      但是，由于BVDV和猪瘟病毒的非常相似，其混在猪瘟活疫苗中常常使检测“失灵”。检测方法的特异性会受到干扰，有时候检出来的BVDV可能是猪瘟，也有可能猪瘟活毒中藏匿的少量BVDV“逃过”检测。因此如何对二者进行有效区分成为检测方法建立的难点。在检测方法的建立上需要下很大功夫，如若不然，便会导致特异性性不够，不能做到区分两种病原。

      成都天邦研发部经理岳丰雄告诉记者，首先，是可以通过荧光定量RT-PCR方法对猪瘟活疫苗中的BVDV外源病毒做到检测及与CSFV病毒的鉴别检测的；第二，在这其中引物的设计是最重要的一环，引物设计的好坏将直接影响到检测引物的灵敏性及最低检测量。

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